Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 46

Timpii sau temperaturile de incubație care diferă de valorile specificate pot genera rezultate eronate. Orice astfel de modificări trebuie
validate de către utilizator.
Controlul calității
Diferențele în ceea ce privește procesarea țesutului și procedurile tehnice în laboratorul utilizatorului pot cauza o variabilitate
semnificativă a rezultatelor, necesitând efectuarea cu regularitate de controale interne, în plus față de următoarele proceduri.
Probele de control trebuie să fie probe proaspete de autopsie/biopsie/chirurgicale, fixate în formalină, procesate și încorporate în ceară
de parafină cât mai curând posibil și în aceeași manieră ca și probele pacientului.
Țesutul de control pozitiv
Folosit pentru a indica țesuturile pregătite corect și tehnicile de colorare adecvate.
O probă de țesut de control pozitiv trebuie să fie inclusă pentru fiecare set de condiții de testare în fiecare etapă de colorare.
Un țesut cu colorare pozitivă slabă este mai adecvat decât un țesut cu colorare pozitivă puternică în vederea unui control optim al
calității și pentru a detecta nivelurile minore de degradare a reactivului.
Țesutul de control pozitiv recomandat este pielea.
Dacă țesutul de control pozitiv nu demonstrează colorația pozitivă, rezultatele obținute cu acele probe de testare trebuie considerate
nevalide.
Țesutul de control negativ
Trebuie examinat după țesutul de control pozitiv pentru a verifica specificitatea informațiilor de etichetare ale antigenului țintă în funcție
de anticorpul primar.
Țesutul de control negativ recomandat este cerebelul.
Ca alternativă, varietatea de tipuri diferite de celule prezente în majoritatea secțiunilor tisulare oferă frecvent locuri de control negativ, dar
acest lucru trebuie verificat de către utilizator.
Colorația nespecifică, dacă este prezentă, are, de obicei, un aspect difuz. Colorația sporadică a țesutului conjunctiv poate fi observată,
de asemenea, în secțiuni de țesuturi fixate în mod excesiv în formalină. Folosiți celule intacte pentru interpretarea rezultatelor de
colorare. Celulele necrotice sau degenerate se colorează deseori într-un mod nespecific.
urmare a legării non-imunologice a proteinelor sau produșilor de reacție ai substratului. Acestea pot fi cauzate, de asemenea, de
enzimele endogene precum pseudoperoxidaza (eritrocite), peroxidaza endogenă (citocromul C) sau biotina endogenă (de exemplu,
ficat, sân, creier, rinichi), în funcție de tipul de imunocolorație folosit. Pentru a diferenția activitatea enzimelor endogene sau legarea
nespecifică a enzimelor de imunoreactivitatea specifică, pot fi colorate țesuturi suplimentare de la pacient numai cu substrat-cromogen
sau, respectiv, complexe enzimatice (avidină-biotină, streptavidină, polimer etichetat) și substrat-cromogen. În cazul în care colorația
specifică are loc în țesutul de control negativ, rezultatele obținute pe probele pacientului trebuie să fie considerate nevalide.
Reactivul de control negativ
Folosiți un reactiv de control negativ non-specific în locul anticorpului primar cu o secțiune din fiecare specimen al pacientului pentru a
evalua colorația nespecifică și a permite o mai bună interpretare a colorării specifice la situl antigenului.
Țesutul pacientului
Examinați specimenele pacientului colorate cu NCL-L-5D3 ultimele. Intensitatea colorației pozitive trebuie evaluată în contextul oricărei
colorații de fond nespecifice a reactivului de control negativ. La fel ca în cazul oricărui test imunohistochimic, un rezultat negativ
înseamnă că antigenul nu a fost detectat, și nu că antigenul a fost absent în celulele/țesuturile analizate. Dacă este necesar, folosiți un
panel pentru anticorpi pentru identificarea reacțiilor fals negative.
Rezultate așteptate
Țesuturi normale
Clona 5D3 a detectat citokeratinele 8 și 18 în citoplasma tuturor epitelillor simple glandulare și tranziționale. Nu s-a observat colorare în
epiteliul scuamos normal stratificat din diverse situri, în afara stratului de celule bazale, și o varietate de țesuturi non-epiteliale (Număr
total de țesuturi normale evaluate = 158).
Țesuturi anormale
Clona 5D3 a colorat 25/33 adenocarcinoame ale colonului, 2/3 carcinoame cu celule scuamoase ale esofagului, 3/3 adenocarcinoame
ale stomacului, 2/3 adenocarcinoame ale plămânului, 2/3 adenocarcinoame ale pancreasului, 3/3 carcinoame uroteliale de grad
scăzut ale vezicii urinare, 1/2 carcinoame papilare ale tiroidei, 3/3 carcinoame ductale invazive ale sânului, 2/3 carcinoame cu celule
scuamoase ale colului uterin, 2/2 adenocarcinoame ale prostatei și 5/5 adenocarcinoame ale vezicii urinare. Nu a fost observată vreo
colorare în 0/3 astrocitoame și 0/3 carcinoame cu celule clare renale (Număr total de cazuri anormale evaluate= 69).
NCL-L-5D3 este recomandat pentru detectarea proteinelor umane de citokeratină 8 și 18 în țesuturile normale și
neoplazice și ca adjuvant la histopatologia convențională utilizând colorații histochimice neimunologice.
Limitări generale
Imunohistochimia este un proces de diagnostic cu mai multe etape, care constă din instruirea specializată în ceea ce privește alegerea
reactivilor adecvați; alegerea, fixarea și procesarea țesutului; prepararea lamei IHC; și interpretarea rezultatelor de colorare.
Colorarea tisulară depinde de manipularea și procesarea țesutului înainte de colorare. Fixarea, congelarea, dezghețarea, spălarea,
uscarea, încălzirea, secționarea necorespunzătoare sau contaminarea cu alte țesuturi ori fluide pot cauza artefacte, captura anticorpilor
sau rezultate fals negative. Rezultatele inconsecvente pot fi atribuite diferențelor în ceea ce privește metodele de fixare și încorporare,
ori neregularităților inerente ale țesutului.
Contracolorația excesivă sau incompletă poate compromite interpretarea adecvată a rezultatelor.
Interpretarea clinică a oricărei colorări sau a absenței acesteia trebuie completată cu studii morfologice utilizând controale adecvate
și trebuie evaluată în contextul antecedentelor clinice ale pacientului, precum și al altor teste de diagnosticare efectuate de către un
patolog calificat.
Anticorpii de la Leica Biosystems Newcastle Ltd sunt destinați utilizării, conform indicațiilor, fie pe secțiuni congelate, fie pe secțiuni
încorporate în parafină cu cerințe de fixare specifice. Poate apărea exprimarea neașteptată a antigenului, în special în neoplasme.
Interpretarea clinică a oricărei secțiuni tisulare colorate trebuie să includă analiza morfologică și evaluarea probelor de control adecvate.
5D3-L-CE
Page 45
4
2
Se pot observa rezultate fals pozitive ca
3