Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 43

Minőség-ellenőrzés
A felhasználó laboratóriumában alkalmazott szövetfeldolgozási és technikai eljárások eltérései jelentős különbséget okozhatnak az
eredményekben, ami az alábbi eljárásokon túl belső kontrollok rendszeres futtatását teszi szükségessé.
Kontrollként friss boncolási/biopsziás/sebészeti mintákat kell használni, amelyeket a lehető leghamarabb a betegmintákkal megegyező
módon kell formalinban fixálni, feldolgozni és paraffinviaszba ágyazni.
Pozitív szövetkontroll
A megfelelő szövet-előkészítés és festési technikák ellenőrzésére használatos.
Minden tesztelési körülményegyüttes esetében és minden megfestési sorozatban kell alkalmazni egy pozitív szövetkontrollt.
A gyengén pozitív festődésű szövet alkalmasabb az erősebben pozitív festődésű szövetnél az optimális minőség-ellenőrzéshez,
valamint a kismértékű reagensbomlás észleléséhez.
A javasolt pozitív kontrollszövet a bőr.
Ha a pozitív szövetkontroll nem mutat pozitív festődést, a vizsgált minták eredményeit érvénytelennek kell tekinteni.
Negatív szövetkontroll
A pozitív szövetkontroll után azért kell megvizsgálni, hogy a vizsgált antigén elsődleges antitest segítségével történő jelölésének
specificitását ellenőrizni lehessen.
A javasolt negatív kontrollszövet a kisagy.
Ezenkívül a legtöbb szövetmetszetben jelen lévő különböző sejttípusok gyakran használhatók negatív kontrollként, de ezeket a
felhasználónak kell ellenőriznie.
Ha van nem specifikus festődés, az rendszerint diffúz megjelenésű. A formalinban túlfixált szövetekből származó metszeteknél a
kötőszövet szórványos festődése is megfigyelhető. A festési eredmények értelmezésére ép sejteket használjon. A nekrotizált vagy
degenerálódott sejtek gyakran nem specifikusan festődnek meg.
kötődése miatt álpozitív eredmények jelentkezhetnek. Okozhatják ezt olyan endogén enzimek is, mint a pszeudoperoxidáz (eritrociták),
endogén peroxidáz (citokróm C), illetve endogén biotin (pl. máj, mell, agy, vese), az alkalmazott immunmegfestés típusától függően. Az
endogén enzim aktivitásának vagy az enzimek nem specifikus kötődésének a specifikus immunreakciótól való megkülönböztetésére
további betegszövetek festhetők kizárólag szubsztrát–kromogén oldattal vagy enzimkomplexekkel (avidin-biotin, sztreptavidin, jelölt
polimer) és szubsztrát–kromogénnel. Ha a negatív szövetkontroll specifikus festődést mutat, a betegminták eredményeit érvénytelennek
kell tekinteni.
Negatív reagenskontroll
A nem specifikus festődés kiértékeléséhez és az antigén helyén létrejövő specifikus festődés jobb értelmezéséhez minden betegminta
esetén egy metszeten alkalmazzon az elsődleges antitest helyett nem specifikus negatív reagenskontrollt.
Betegszövet
Az NCL-L-5D3 reagenssel festett betegmintákat vizsgálja meg utolsóként. A pozitív festődés intenzitását a negatív reagenskontroll
esetleges nem specifikus háttérfestődésének viszonylatában értékelje. Mint minden immunhisztokémiai vizsgálatnál, a negatív
eredmény azt jelenti, hogy az antigén nem volt kimutatható, nem pedig azt, hogy az antigén nem volt jelen a vizsgált sejtekben/
szövetben. Szükség esetén az álnegatív reakciók azonosítására használjon antitestpanelt.
Várható eredmények
Normál szövetek
Az 5D3 klón kimutatta a citokeratin 8-at és 18-at minden egyszerű mirigyhámban és átmeneti hámban a citoplazmában. Nem volt
festődés látható a különböző helyekről származó normál többrétegű laphámban, kivéve a bazális sejtrétegben és különféle nem
epiteliális szövetekben (a vizsgált normál szövetek összesített száma = 158).
Kóros szövetek
Az 5D3 klón megfestett 25/33 vastagbél-adenokarcinómát, 2/3 laphámsejtes nyelőcső-karcinómát, 3/3 gyomor-adenokarcinómát, 2/3
tüdő-adenokarcinómát, 2/3 hasnyálmirigy-adenokarcinómát, 3/3 lassan növekvő urotheliális húgyhólyag-karcinómát, 1/2 papilláris
pajzsmirigy-karcinómát, 3/3 invazív duktális emlőkarcinómát, 2/3 laphámsejtes méhnyak-karcinómát, 2/2 prosztata-adenokarcinómát
és 5/5 húgyhólyag-adenokarcinómát. Nem volt festődés megfigyelhető az asztrocitómák (0/3) és a világossejtes vesekarcinómák (0/3)
esetében (vizsgált kóros esetek összesített száma = 69).
Az NCL-L-5D3 a humán citokeratin 8 és 18 fehérje kimutatására ajánlott egészséges és tumoros szövetekben, a nem
immunológiai hisztokémiai festést használó hagyományos kórszövettani eljárások kiegészítéseként.
Általános korlátozások
Az immunhisztokémia több lépésből álló diagnosztikai folyamat, amely a következőket foglalja magában: speciális képzés alapján a
megfelelő reagensek kiválasztása; a szövetek kiválasztása, fixálása és feldolgozása; az IHC tárgylemez előkészítése; és a festési
eredmények értelmezése.
A szövet festődése függ a szövet festés előtti kezelésétől és feldolgozásától. A nem megfelelő fixálás, a fagyasztás, olvasztás, mosás,
szárítás, melegítés, metszetkészítés, illetve a más szövetekkel vagy folyadékokkal történő szennyezés műtermékeket, az antitestek
befogását, illetve álnegatív eredményeket okozhat. Ellentmondó eredményekhez vezethetnek a fixálási vagy beágyazási módszerek
eltérései, illetve a szövet eredendő rendellenességei.
A túlzott vagy hiányos kontrasztfestés ronthatja az eredmények megfelelő értelmezését.
Minden festődés meglétének vagy hiányának klinikai értelmezését morfológiai vizsgálatokkal és megfelelő kontrollokkal kell kiegészíteni,
valamint az értékelést a beteg klinikai kórtörténete és egyéb diagnosztikai vizsgálatok figyelembevételével, képzett patológusnak kell
elvégeznie.
A Leica Biosystems Newcastle Ltd által biztosított antitestek specifikus fixálási követelmények mellett, az utasításoknak megfelelően
fagyasztott vagy paraffinba ágyazott metszeteken történő felhasználásra szolgálnak. Időnként váratlan antigén-expresszió fordulhat elő,
különösen daganatok esetében. Bármely festett szövetmetszet klinikai értelmezéséhez morfológiai elemzést is kell végezni, és ki kell
értékelni a megfelelő kontrollokat.
5D3-L-CE
Page 42
2
A fehérjék vagy a szubsztrát reakciótermékeinek nem immunológiai
3
4