Leica BIOSYSTEMS Novocastra Mode D'emploi page 40

Всички спесимени преди и след фиксация, както и всички материали, изложени на тях, трябва да се третират като възможни
преносители на инфекция и да се изхвърлят, като се вземат правилни предпазни мерки.
и избягвайте контакт на кожата и лигавиците с реагенти и спесимени. При контакт на реагенти или спесимени с чувствителни
зони измийте зоните с обилно количество вода. Потърсете медицинска помощ.
Свеждайте до минимум микробната контаминация на реагентите, в противен случай може да се появи увеличаване на
неспецифичното оцветяване.
Инкубационни времена или температури, различни от посочените, могат да доведат до грешни резултати. Всички подобни
промени трябва да бъдат валидирани от потребителя.
Качествен контрол
Различията в обработката на тъканите и техническите процедури в лабораторията на потребителя могат да доведат до
значително вариране на резултатите, налагащо редовно извършване на вътрешен контрол в допълнение към следните
процедури.
Контролите трябва да са свежи спесимени, взети по време на аутопсия/биопсия/операция, фиксирани във формалин,
обработени и вградени в парафинов восък, възможно най-бързо, по същия начин като проба(та) на пациента(ите).
Позитивна тъканна контрола
Използва се, за да се покажат правилно приготвени тъкани и правилни техники на оцветяване.
Една позитивна тъканна контрола трябва да бъде включена за всеки сет с тестови условия при всяка серия проби за
оцветяване.
Тъкан със слабо позитивно оцветяване е по-подходяща от тъкан със силно позитивно оцветяване за оптимален качествен
контрол и за откриване на по-малки нива на деградация на реагента.
Препоръчителната тъкан за позитивна контрола е кожа.
Ако позитивната тъканна контрола не показва позитивно оцветяване, резултатите от спесимените, включени в теста, трябва да
се считат за невалидни.
Негативна тъканна контрола
Трябва да се изследва след позитивната тъканна контрола, за да се провери специфичността на белязването на таргетния
антиген от първичното антитяло.
Препоръчителната тъкан за негативна контрола е малкият мозък.
Алтернативно, разнообразието от различни видове клетки, присъстващи в повечето тъканни срези, често предлага места за
негативна контрола, но това трябва да се провери от потребителя.
Неспецифичното оцветяване, ако присъства, обикновено е дифузно на вид. Спорадично оцветяване на съединителна
тъкан може да се наблюдава и в части от прекомерно фиксирани във формалин тъкани. Използвайте интактни клетки за
интерпретация на резултатите от оцветяването. Некротичните или дегенериралите клетки често се оцветяват неспецифично.
Може да се видят неверни позитивни резултати поради неимунологично свързване на протеини или реакционни продукти
на субстрата. Те може да са причинени и от ендогенни ензими, като например псевдопероксидаза (еритроцити), ендогенна
пероксидаза (цитохром C) или ендогенен биотин (напр. черен дроб, гърда, мозък, бъбрек) в зависимост от типа на използваното
имунно оцветяване. За диференциране на ендогенна ензимна активност или неспецифично ензимно свързване от специфична
имунна реактивност ексклузивно може да се оцветят допълнителни тъкани от пациента, съответно със субстрат-хромоген
или с ензимни комплекси (авидин-биотин, стрептавидин, маркиран полимер) и субстрат-хромоген. Ако се появи специфично
оцветяване в негативната тъканна контрола, резултатите от спесимените на пациентите трябва да се считат за невалидни.
Негативна контрола на реагента
Използвайте неспецифична негативна контрола на реагента, вместо първичното антитяло, със срез от всеки спесимен на
пациента, за да се направи оценка на неспецифичното оцветяване и да се даде по-добра интерпретация на специфичното
оцветяване на мястото на антигена.
Тъкан от пациента
Изследвайте спесимените на пациенти, оцветени последно с NCL-L-5D3. Наситеността на позитивното оцветяване трябва
да бъде оценена в контекста на всяко неспецифично фоново оцветяване на негативната контрола на реагента. Както при
всеки имунохистохимичен тест, един отрицателен резултат означава, че антигенът не е открит, а не че антигенът отсъства
в анализираните клетки/тъкан. Ако се налага, използвайте панел от антитела за идентифициране на фалшиво отрицателни
реакции.
Очаквани резултати
Нормални тъкани
Клонинг 5D3 открива цитокератини 8 и 18 в цитоплазмата на всички прости жлезисти и преходни епители. Не се наблюдава
оцветяване при нормални стратифицирани плоскоклетъчни епители от различни места, с изключение на слоя базални клетки и
редица неепителни тъкани (общ брой на оценените нормални тъкани = 158).
Абнормни тъкани
Клонинг 5D3 оцветява 25/33 аденокарцинома на ободното черво, 2/3 плоскоклетъчни карцинома на хранопровода, 3/3
аденокарцинома на стомаха, 2/3 аденокарцинома на белия дроб, 2/3 аденокарцинома на панкреаса, 3/3 високодиференцирани
уротелиални карцинома на пикочния мехур, 1/2 папиларни карцинома на щитовидната жлеза, 3/3 инвазивни дуктални
карцинома на гърдата, 2/3 плоскоклетъчни карцинома на цервикса, 2/2 аденокарцинома на простатата и 5/5 аденокарцинома на
пикочния мехур. Не се наблюдава оцветяване при 0/3 астроцитома и 0/3 светлоклетъчни карцинома на бъбреците (общ брой на
оценените абнормни случаи = 69).
Продуктът NCL-L-5D3 се препоръчва за откриване на човешки протеин цитокератин 8 и 18 в нормални
и неопластични тъкани като допълнение към конвенционалната хистопатология с използване на
неимунологични хистохимични оцветявания.
5D3-L-CE
Page 39
Никога не пипетирайте реагенти с уста
1
2
3