Théorie De L'application Do600 - Thermo Scientific NanoDrop One Manuel De L'utilisateur

Mesure DO600
Théorie de l'application DO600
L'application DO600 mesure la transmission de la lumière et utilise cette valeur pour calculer
l'absorbance. En spectroscopie, la lumière transmise est définie comme toute lumière qui n'est
pas absorbée, réfléchie et diffusée par un échantillon.
Dans le cas des cellules vivantes, la plupart de la lumière incidente est transmise à travers
l'échantillon et non pas diffusée, réfléchie ou absorbée. La quantité de lumière diffusée est
faible et peut varier d'un instrument à l'autre. Résultat, les valeurs d'absorbance calculées lues
sont normalement très basses.
Les valeurs d'absorbance calculées sont utilisées pour déterminer la densité des cellules dans les
solutions en cellules/ml. Les concepts et formules physiques qui lient les propriétés optiques
des cellules vivantes à la concentration sont les suivants :
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• Les cellules, qui ont un indice de réfraction différent du milieu environnant, réfléchissent
et diffusent de manière aléatoire la lumière en dehors du trajet optique incident. La
quantité de la diffusion est proportionnelle à la densité des cellules dans l'échantillon.
• L'équation de Beer est utilisée pour relier l'absorbance à la concentration. Pour plus de
détails, reportez-vous à
• Pour les lectures avec cuvette avec l'instrument NanoDrop One, les lectures d'absorbance
précises sont normalement comprises dans la plage qui va de 0,04 A à 1,5 A.
Des dilutions en série de l'échantillon sont normalement nécessaires pour amener les
lectures d'absorbance dans cette plage.
• Toutes les mesures doivent être faites avec le même type de spectrophotomètre et de
méthode (par ex., socle ou cuvette) car la quantité de lumière diffusée capturée varie selon
la configuration optique. Lorsque vous utilisez un spectrophotomètre ou une méthode
différent, calculez et appliquez un facteur de conversion pour les résultats rapportés.
Par exemple, pour comparer les lectures de diamètre externe en utilisant le socle par
rapport à ces mêmes diamètres avec une cuvette, vous pouvez calculer un facteur de
conversion comme suit :
Facteur de conversion = Diamètre externe cuvette/Diamètre externe socle
Calculs pour les mesures DO600.
Thermo Scientific