Thermo Scientific NanoDrop One Manuel De L'utilisateur page 78

Mesure Protéine A280
Les concentrations protéiques calculées sont basées sur
la valeur d'absorbance à 280 nm, le coefficient
d'extinction sélectionné (ou saisi) et la longueur du trajet
optique de l'échantillon. Une correction de la ligne de
base en un point unique (ou correction de l'analyse) peut
être appliquée.
La concentration est exprimée en unités de masse.
Sur Internet, des calculateurs permettent de convertir la
concentration exprimée en unités de masse en unités
molaires sur la base de la séquence de l'échantillon.
Les valeurs d'absorbance à 260 nm et 280 nm sont
utilisées pour calculer les rapports de pureté pour les
échantillons de protéines mesurés.
Les rapports de pureté sont sensibles à la présence de
contaminants dans l'échantillon, notamment aux résidus
des solvants et réactifs normalement utilisés pendant la
purification des échantillons.
72 Manuel de l'utilisateur du NanoDrop One
Valeurs mesurées
Absorbance A280
Remarque : Pour les mesures d'absorbance de micro-volumes et les
mesures prises avec des cuvettes non standard (de dimensions autres que
10 mm), les spectres sont normalisés à l'équivalent d'une longueur de trajet
optique de 10 mm.
• Les valeurs d'absorbance des protéines sont mesurées à 280 nm en
utilisant le spectre normalisé. Si Correction de la ligne de base n'est pas
sélectionné, il s'agit de la valeur A280 rapportée et de la valeur utilisée
pour calculer la concentration protéique.
• Si Correction de la ligne de base
normalisée et corrigée en fonction de la ligne de base à 280 nm est
rapportée et utilisée pour calculer la concentration protéique.
Absorbance A260
• La valeur d'absorbance normalisée et corrigée en fonction de la ligne de
base à 260 nm est également rapportée.
Longueur du trajet optique de l'échantillon
• Pour les mesures de micro-volumes, le logiciel sélectionne la longueur
de trajet optique optimale (entre 1,0 mm et 0,03 mm) sur la base de
l'absorbance de l'échantillon à la longueur d'onde de l'analyse.
• Pour les mesures avec une cuvette, la longueur du trajet optique est
déterminée par le paramètre Longueur du trajet optique de la cuvette
dans le logiciel (reportez-vous à
• Les spectres et les valeurs d'absorbance affichés sont normalisés à
l'équivalent d'une longueur de trajet optique de 10 mm.
est sélectionné, la valeur d'absorbance
Paramètres généraux).
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