Meilleures Pratiques Pour Les Mesures Do600 - Thermo Scientific NanoDrop One Manuel De L'utilisateur

Meilleures pratiques pour les mesures DO600

Thermo Scientific
• Vérifiez que l'échantillon entre dans les
• Faites le blanc avec le milieu de croissance ou de culture dans lequel les cellules d'intérêt
sont suspendues.
• Exécutez un cycle de blanc
l'absorbance. Si la solution de milieu montre une forte absorbance à, ou près de,
la longueur d'onde de l'analyse (600 nm), il est possible que vous deviez choisir une
solution de milieu ou une application différentes. Pour plus d'informations, reportez-vous
à Choisir et mesurer un
• Effectuez des dilutions comme nécessaire pour assurer que les cultures d'échantillon ne
dépassent pas la gamme dynamique linéaire du dosage avant que la culture n'atteigne la
phase stationnaire. La gamme linéaire dépend largement de la configuration optique et,
par conséquent, diffère pour les mesures effectuées avec le socle et celle effectuées avec une
cuvette. Pour déterminer la gamme linéaire :
– Mesurez une série de dilutions en utilisant une jeune culture nocturne (~16 h) de la
souche microbienne.
– Représentez graphiquement les mesures DO600 en fonction du facteur de dilution.
La limite de détection supérieure est la valeur DO600 mesurée à laquelle il cesse d'y avoir
une corrélation linéaire entre les facteurs de dilution et les lectures DO600.
• Mélangez les échantillons délicatement mais complètement juste avant de prendre une
aliquote pour la mesure.
• Pour les mesures de micro-volumes :
– Vérifiez que les surfaces du socle ont été
– Évitez d'introduire des bulles lors du mélange et du pipetage.
– Commencez rapidement la mesure pour éviter toute sédimentation ou évaporation.
– Suivez les meilleures pratiques pour les mesures de micro-volumes.
– Utilisez un volume d'échantillon de 2 μl. Pour plus d'informations, reportez-vous à
Volumes d'échantillon
– Pour les échantillons dilués qui font preuve d'une faible absorbance à 600 nm,
utilisez une autre longueur d'onde, par exemple 400 nm, pour mesurer l'absorbance,
ou utilisez des mesures avec cuvette au lieu de mesures de micro-volumes.
• Pour les mesures avec la cuvette (instruments NanoDrop One
– Utilisez des cuvettes propres en plastique, verre ou quartz.
– Suivez les meilleures pratiques pour les mesures avec une cuvette.
– N'utilisez pas la fonctionnalité
limites de détection d'absorbance
pour évaluer la contribution de votre solution de milieu à
blanc.
nettoyées
recommandés.
d'agitation automatique pour ce dosage.
de l'instrument.
et conditionnées correctement
C
uniquement) :
Manuel de l'utilisateur du NanoDrop One
Mesure DO600
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