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Meilleures pratiques pour les mesures d'acides nucléiques
Sujets similaires
Thermo Scientific
• Isolez et purifiez les échantillons d'acides nucléiques avant la mesure pour éliminer les
impuretés. Selon l'échantillon, les impuretés peuvent consister en de l'ADN, de l'ARN,
des nucléotides libres, des protéines, certains composants de solution tampon et des
colorants. Pour plus d'informations, reportez-vous à
Remarque Les réactifs d'extraction tels que la guanidine, le phénol et l'EDTA
contribuent à l'absorbance entre 230 nm et 280 nm, et influeront sur les résultats de
mesure s'ils sont présents dans les échantillons (même en quantités résiduelles).
• Vérifiez que l'absorbance de l'échantillon est comprise dans les
d'absorbance
de l'instrument.
• Faites le blanc en utilisant la même solution tampon que celle utilisée pour remettre en
suspension l'analyte d'intérêt. La solution à blanc doit être d'un pH et d'une force ionique
similaires à ceux de la solution d'analyte.
• Exécutez un
cycle de blanc
l'absorbance. Si le tampon montre une forte absorbance à ou près de la longueur d'onde
de l'analyse (normalement 260 nm), il est possible que vous deviez choisir un tampon ou
une application différents. Pour plus d'informations, reportez-vous à
un
blanc.
• Pour les mesures de micro-volumes :
–
Vérifiez que les surfaces du socle ont été
–
Si possible, chauffez les échantillons hautement concentrés ou de grosses molécules,
comme l'ADN génomique ou Lambda, à 63 °C (145 °F) et mélangez-les au vortex
délicatement (mais complètement) avant de prendre une mesure. Évitez d'introduire
des bulles lors du mélange et du pipetage.
–
Suivez les
meilleures pratiques pour les mesures de micro-volumes.
–
Utilisez un volume d'échantillon de 1 à 2 μl. Pour plus d'informations, reportez-vous
à
Volumes d'échantillon
• Pour les mesures avec une cuvette (instruments NanoDrop One
utilisez des cuvettes compatibles et suivez les
avec une cuvette.
• Mesurer un échantillon micro-volume
• Mesurer un échantillon en utilisant une cuvette
• Meilleures pratiques pour les mesures de micro-volumes
Préparation des
pour évaluer la contribution de votre solution tampon à
nettoyées
recommandés.
meilleures pratiques pour les mesures
Manuel de l'utilisateur du NanoDrop One
Mesure ADNdb, ADNsb ou ARN
échantillons.
limites de détection
Choisir et mesurer
et
conditionnées
correctement
C
uniquement),
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