Spectre D'absorbance; Absorbance De L'échantillon; Concentration De L'échantillon; Correction De La Ligne De Base - Thermo Scientific NanoDrop One Manuel De L'utilisateur

=
Absorbance
Équation de Beer-Lambert
A =
Où :
A = absorbance UV en en unités d'absorbance (A)
ε
= coefficient d'absorptivité dépendant de la longueur d'onde
(ou coefficient d'extinction) en litres/mol-cm
b = longueur du trajet optique en cm
c = concentration en analyte en moles/litre ou molarité (M)
Thermo Scientific
intensity
sample
–
log
------------------------------------- -
intensity
blank
ε b c ⋅ ⋅
Échantillonnage de micro-volumes — Fonctionnement

Spectre d'absorbance

La lumière passe à travers la colonne liquide et atteint le détecteur,
qui génère un spectre d'absorbance en fonction de la longueur
d'onde. Le spectre montre la quantité de lumière absorbée par les
molécules de l'échantillon à chacune des longueurs d'onde mesurées.
Remarque : pour empêcher toute évaporation, qui affecte la
précision des mesures, fermez rapidement le bras après avoir chargé
un échantillon ou un blanc.
L'exemple ci-contre montre un spectre d'absorbance type obtenu
avec un échantillon d'acides nucléiques. Le spectre est mesuré de
190 nm à 850 nm. La gamme affichée peut varier pour chaque
application.
Absorbance de l'échantillon
Lorsque le blanc est fait, le spectre de référence obtenu avec la
solution à blanc est enregistré en mémoire. Pour chaque mesure
d'échantillon, les intensités de l'échantillon ainsi que celles du blanc
sont utilisées pour calculer l'absorbance de l'échantillon
conformément à l'équation ci-contre.
Concentration de l'échantillon
L'équation de Beer-Lambert (la Loi de Beer) indiquée ci-contre est
utilisée pour corréler l'absorbance de l'échantillon avec la
concentration.
La longueur du trajet optique est la distance entre les deux socles,
qui varie en temps réel pendant chaque mesure. Cette technique de
longueur du trajet optique à détermination automatique donne des
résultats de concentration précis sur une vaste gamme dynamique.

Correction de la ligne de base

Pour certaines applications, l'instrument peut être configuré pour
appliquer une correction de la ligne de base à chaque mesure pour
minimiser les éventuels décalages causés par les particules de
diffusion de la lumière dans les spectres de l'échantillon. La
correction soustrait la valeur d'absorbance à une longueur d'onde de
référence qui est proche de zéro de la valeur d'absorbance à chaque
longueur d'onde du spectre, essentiellement « en ancrant » le spectre
à zéro unités d'absorbance à la longueur d'onde de référence.
Manuel de l'utilisateur du NanoDrop One
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