Thermo Scientific NanoDrop One Manuel De L'utilisateur page 76

Mesure Protéine A280
Cette application offre six options (indiquées ci-contre)
pour sélectionner un coefficient d'extinction approprié
pour chaque échantillon mesuré, à utiliser en conjonction
avec la Loi de Beer pour calculer la concentration
de l'échantillon.
Si le coefficient d'extinction de l'échantillon est connu,
ε
choisissez l'option + PM (molaire) ou
et saisissez la valeur. Sinon, calculez le coefficient
d'extinction ou choisissez l'option qui correspond le
mieux à la solution d'échantillon.
Conseil : de manière idéale, le coefficient d'extinction
devrait être déterminé de manière empirique en utilisant
une solution de la protéine à l'étude d'une concentration
connue utilisant le même tampon.
La plupart des sources rapportent les coefficients
d'extinction pour les protéines mesurées à, ou près de,
280 nm dans un tampon phosphate ou un autre tampon
physiologique. Ces valeurs fournissent une précision
suffisante pour les évaluations de routine de la
concentration en protéines.
70 Manuel de l'utilisateur du NanoDrop One
Options disponibles pour le coefficient d'extinction
• 1 Abs = 1 mg/ml, où le type d'échantillon et/ou le coefficient
d'extinction est inconnu (donne une estimation très approximative de
la concentration protéique)
• BSA (sérum albumine bovine, 6,67 l/gm-cm)
ε
1 % (de masse)
• IgG (tout anticorps mammifère, 13,7 l/gm-cm)
• Lysozyme (lysozyme du blanc d'œuf, 26,4 l/gm-cm)
• Autre protéine (
l'utilisateur
• Autre protéine (
l'utilisateur
Remarque : Pour plus d'informations, reportez-vous à
Coefficients d'extinction publiés
Les coefficients d'extinction publiés pour les protéines peuvent être
indiqués comme suit :
• Coefficient d'absorptivité molaire dépendant de la longueur d'onde
(ou d'extinction) (
• Coefficient d'extinction de la solution en pourcentage (
en (g/100 ml)
dans une cuvette de 1 cm )
• Valeurs d'absorbance des protéines pour les solutions à 0,1 %
(soit 1 mg/ml)
Conseil : Évaluez attentivement les valeurs publiées pour assurer que
l'unité de mesure soit appliquée correctement.
ε
+ PM), coefficient d'extinction molaire spécifié par
ε
1 %), coefficient d'extinction de masse spécifié par
ε
-1 -1
) en M cm
-1 -1
cm (soit une solution à 1 % ou 1 g/100 ml mesurée
Type d'échantillon.
ε
1%)
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