Kits Et Protocoles De Dosage De Protéines; Travailler Avec Les Courbes D'étalonnage - Thermo Scientific NanoDrop One Manuel De L'utilisateur

Mesure Protéine BCA
Kits et protocoles de dosage de protéines
Reportez-vous au site Internet du NanoDrop pour les kits et les protocoles à jour pour les
instruments NanoDrop One. Suivez les recommandations du fabricant du kit de dosage pour
tous les étalons et échantillons (inconnus). Veuillez à ce que chacun de ceux-ci soit soumis à la
même synchronisation et à la même température pendant tout le dosage.
Les étalons de protéines permettant de générer une courbe d'étalonnage peuvent aussi être
fournis par le fabricant du kit. Étant donné que les socles du NanoDrop One peuvent mesurer
des concentrations protéiques plus élevées que les spectrophotomètres à cuvette traditionnels,
il est possible que vous deviez fournir vos propres étalons de protéines de concentrations plus
élevées que ceux fournis par le fabricant. Par exemple, des étalons supplémentaires peuvent
être nécessaires pour assurer que la courbe d'étalonnage couvre la gamme dynamique du
dosage et la gamme attendue des échantillons inconnus.
Travailler avec les courbes d'étalonnage
Une courbe d'étalonnage est nécessaire pour les analyses de protéines colorimétriques.
96 Manuel de l'utilisateur du NanoDrop One
• Chaque expérience requiert une nouvelle courbe d'étalonnage.
• Préparez les étalons et les échantillons inconnus de la même manière. Reportez-vous aux
consignes et recommandations du fabricant du kit.
– Toutes les solutions de référence et d'étalons doivent utiliser le même tampon que
celui utilisé pour remettre en suspension les échantillons auquel on ajoutera le même
volume de réactif ajouté aux échantillons.
– Le premier étalon est une mesure de référence. La solution de référence ne doit
contenir aucun des analytes d'intérêt. (la mesure de référence n'est pas la même chose
que la mesure de blanc. Cette application requiert les deux).
– La plage de concentration des étalons doit couvrir la gamme dynamique du dosage
et la gamme attendue des échantillons inconnus. Les concentrations des analytes
des échantillons ne sont pas extrapolées au-delà de la concentration de l'étalon le
plus élevé.
• Utilisez l'écran de paramétrage de l'application pour saisir les valeurs de concentration des
étalons et spécifier comment les étalons et les échantillons seront mesurés (nombre de
réplicats, etc.).
– Selon le paramètre Type de
en utilisant deux étalons ou plus.
– Le logiciel a besoin d'une mesure de référence et autorise jusqu'à 7 étalons.
courbe, il est possible de générer une courbe d'étalonnage
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