Leica BIOSYSTEMS Kreatech FISH probes FGFR1 (8p11) – XL Mode D'emploi page 38

Kreatech FISH probes 39
Unverdünnte Reagenzien müssen direkt nach der Verwendung
wieder bei 2 - 8 °C eingelagert werden. Verdünnte/gemischte
Sondenreagenzien, die in einem BOND Behälter aufbewahrt werden,
müssen nach der Verwendung wieder bei 2 - 8 °C gelagert werden.
Nach der Sondenverdünnung sind Sondengemische mindestens 30
Tage lang stabil. Nach diesem Zeitraum können bei Verwendung der
verdünnten Mischung suboptimale Ergebnisse auftreten.
Es gibt keine offensichtlichen Zeichen, die auf eine Kontaminierung
und/oder Instabilität der Sonde hinweisen. Lagerbedingungen, die
von den oben angegebenen abweichen, müssen vom Anwender
verifiziert werden.
Fehlerbehebung
Vorbehandlung (Überverdauung): In der Gebrauchsanweisung für
BOND Enzyme Pretreatment Kit (AR9551) wird empfohlen, eine
Verdünnung mit 1 Tropfen Enzyme Concentrate 1 in 7 ml Diluent
als*Enzyme 1 in der BOND Software zu registrieren.
Dieses *Enzyme 1 ist unter Umständen bei Verwendung in Kombination
mit Heat Induced Epitope Retrieval (HIER) zu stark für bestimmte Sonden
und führt zu einer Überverdauung des Gewebes. Um Unklarheiten zu
vermeiden, werden sowohl eine zweite Verdünnung von *Enzyme 1
(Verdünnung bis zu 1:300) als auch eine separate Registrierung des
Reagenzes im BOND System als *Enzyme 5 empfohlen. Alternativ kann
eine direkte Verdünnung von Enzyme Concentrate 1 auf bis zu 1:3000
anstatt einer seriellen Verdünnung von *Enzyme 1 durchgeführt werden.
Sondenverdünnung und Signalintensität: Eine endgültige Sonden-
konzentration von 1x wird zur Verwendung empfohlen, die optimale
Sondenbalance hängt jedoch von Faktoren wie dem Gewebealter, der
Gewebefixierung, de Vorbehandlungsprotokoll und den Präferenzen
des Anwenders ab. Optimale Konzentrationen und Sondenverhält-
nisse können schwanken und müssen vom Endanwender empirisch
bestimmt werden.