Leica Novocastra CD71 Mode D'emploi page 43

A megadottaktól eltérő inkubációs idők és hőmérsékletek hibás eredményekhez vezethetnek. A felhasználónak minden ilyen jellegű
változtatást validálnia kell.
Minőség-ellenőrzés
A felhasználó laboratóriumában alkalmazott szövetfeldolgozási és technikai eljárások eltérései jelentős különbséget okozhatnak az
eredményekben, ami az alábbi eljárásokon túl belső kontrollok rendszeres futtatását teszi szükségessé.
Kontrollként friss boncolási/biopsziás/sebészeti mintákat kell használni, amelyeket a lehető leghamarabb a betegmintákkal megegyező
módon kell formalinban fixálni, feldolgozni és paraffinviaszba ágyazni.
Pozitív szövetkontroll
A megfelelő szövet-előkészítés és festési technikák ellenőrzésére használatos.
Minden tesztelési körülményegyüttes esetében és minden megfestési sorozatban kell alkalmazni egy pozitív szövetkontrollt.
A gyengén pozitív festődésű szövet alkalmasabb az erősebben pozitív festődésű szövetnél az optimális minőség-ellenőrzéshez,
valamint a kismértékű reagensbomlás észleléséhez.
2
A javasolt pozitív kontrollszövet a tonsilla.
Ha a pozitív szövetkontroll nem mutat pozitív festődést, a vizsgált minták eredményeit érvénytelennek kell tekinteni.
Negatív szövetkontroll
A pozitív szövetkontroll után azért kell megvizsgálni, hogy a vizsgált antigén elsődleges antitest segítségével történő jelölésének
specificitását ellenőrizni lehessen.
A javasolt negatív kontrollszövet a nyelv.
Ezenkívül a legtöbb szövetmetszetben jelen lévő különböző sejttípusok gyakran használhatók negatív kontrollként, de ezeket a
felhasználónak kell ellenőriznie.
Ha van nem specifikus festődés, az rendszerint diffúz megjelenésű. A formalinban túlfixált szövetekből származó metszeteknél a
kötőszövet szórványos festődése is megfigyelhető. A festési eredmények értelmezésére ép sejteket használjon. A nekrotizált vagy
degenerálódott sejtek gyakran nem specifikusan festődnek meg. A fehérjék vagy a szubsztrát reakciótermékeinek nem immunológiai
3
kötődése miatt álpozitív eredmények jelentkezhetnek. Okozhatják ezt olyan endogén enzimek is, mint a pszeudoperoxidáz (eritrociták),
endogén peroxidáz (citokróm C), illetve endogén biotin (pl. máj, mell, agy, vese), az alkalmazott immunmegfestés típusától függően. Az
endogén enzim aktivitásának vagy az enzimek nem specifikus kötődésének a specifikus immunreakciótól való megkülönböztetésére
további betegszövetek festhetők kizárólag szubsztrát–kromogén oldattal vagy enzimkomplexekkel (avidin-biotin, sztreptavidin, jelölt
polimer) és szubsztrát–kromogénnel. Ha a negatív szövetkontroll specifikus festődést mutat, a betegminták eredményeit érvénytelennek
kell tekinteni.
Negatív reagenskontroll
A nem specifikus festődés kiértékeléséhez és az antigén helyén létrejövő specifikus festődés jobb értelmezéséhez minden betegminta
esetén egy metszeten alkalmazzon az elsődleges antitest helyett nem specifikus negatív reagenskontrollt.
Betegszövet
Az NCL-L-CD71-309 reagenssel festett betegmintákat vizsgálja meg utolsóként. A pozitív festődés intenzitását a negatív reagenskontroll
esetleges nem specifikus háttérfestődésének viszonylatában értékelje. Mint minden immunhisztokémiai vizsgálatnál, a negatív
eredmény azt jelenti, hogy az antigén nem volt kimutatható, nem pedig azt, hogy az antigén nem volt jelen a vizsgált sejtekben/
szövetben. Szükség esetén az álnegatív reakciók azonosítására használjon antitestpanelt.
Várható eredmények
Normál szövetek
A 10F11 klón kimutatta a CD71 fehérjét a csontvelő eritroid prekurzor sejtjeinek (granuláris) citoplazmájában és membránján, valamint
az ileum, a caecum, a vastagbél, a végbél, az endometrium, a petevezeték és a gyomor hámsejtjeiben. Festődés volt továbbá
megfigyelhető a hasnyálmirigy exokrin sejtjeiben, a mellékvese kortikális sejtjeiben, a disztális vesetubulusokban, az agykéreg
piramissejtjeiben, a cerebellum Purkinje-sejtjeiben és vérereiben, a bazális ganglionok vérereiben és a hippocampus neuronjaiban.
Szintén megfestette a szívizmot, a vázizmot, a tonsilla csíraközpontjait, a hepatocitákat, a placenta trofoblasztjait, az alveoláris
makrofágokat és a fültőmirigy vezetékeit. Festődés volt látható továbbá a lép limfoid sejtjeinek egy részében és a nyirokcsomók
makrofágjaiban. (Vizsgált normál esetek összesített száma = 56).
Kóros szövetek
A 10F11 klón az alábbiakat festette meg: 4/4 májdaganat (részletezve: 2/2 hepatocelluláris karcinóma, 1/1 kolangiokarcinóma
és 1/1 metasztatikus karcinóma), 4/4 petefészek-daganat (részletezve: 1/1 malignus csírasejtes daganat, 1/1 szerózus
cisztadenokarcinóma, 1/1 világossejtes karcinóma és 1/1 invazív laphámsejtes karcinóma), 3/4 tüdődaganat (részletezve:
1/1 nem kissejtes karcinóma, 1/1 laphámsejtes karcinóma, 1/1 nagysejtes karcinóma és 0/1 adenokarcinóma), 2/4 papilláris
pajzsmirigy-karcinóma, 2/2 infiltráló duktális emlőkarcinóma, 2/2 gyomor-adenokarcinóma, 2/2 laphámsejtes nyelvkarcinóma,
2/2 laphámsejtes nyelőcső-karcinóma, 2/2 laphámsejtes méhnyak-karcinóma, 2/2 szeminóma, 2/2 vastagbél-adenokarcinóma,
2/2 végbél-adenokarcinóma, 1/2 agydaganat (részletezve: 1/1 plexus choroideus papillóma és 0/1 anaplasztikus asztrocitóma),
1/2 ismeretlen eredetű metasztatikus daganat, 1/2 vesesejtes karcinóma, 1/2 bőrdaganat (részletezve: 1/1 laphámsejtes karcinóma és
0/1 dermatofibroszarkóma) és 1/1 laphámsejtes gégekarcinóma. Nem volt festődés megfigyelhető csecsemőmirigy-daganat (0/1) és
lágyrész-daganatok (0/2) esetén. (Vizsgált tumoresetek összesített száma = 44.)
Az NCL-L-CD71-309 a CD71 fehérje detektálására ajánlott normál és daganatos szövetekben, a nem immunológiai hisztokémiai
festést használó hagyományos kórszövettani eljárások kiegészítéseként.
Általános korlátozások
Az immunhisztokémia több lépésből álló diagnosztikai folyamat, amely a következőket foglalja magában: speciális képzés alapján a
megfelelő reagensek kiválasztása; a szövetek kiválasztása, fixálása és feldolgozása; az IHC tárgylemez előkészítése; és a festési
eredmények értelmezése.
CD71-309
Page 42