Leica Novocastra CD71 Mode D'emploi page 40

Всички спесимени преди и след фиксация, както и всички материали, изложени на тях, трябва да се третират като възможни
преносители на инфекция и да се изхвърлят, като се вземат правилни предпазни мерки. Никога не пипетирайте реагенти с уста
1
и избягвайте контакт на кожата и лигавиците с реагенти и спесимени. При контакт на реагенти или спесимени с чувствителни
зони измийте зоните с обилно количество вода. Потърсете медицинска помощ.
Свеждайте до минимум микробната контаминация на реагентите, в противен случай може да се появи увеличаване на
неспецифичното оцветяване.
Инкубационни времена или температури, различни от посочените, могат да доведат до грешни резултати. Всички подобни
промени трябва да бъдат валидирани от потребителя.
Качествен контрол
Различията в обработката на тъканите и техническите процедури в лабораторията на потребителя могат да доведат до
значително вариране на резултатите, налагащо редовно извършване на вътрешен контрол в допълнение към следните
процедури.
Контролите трябва да са свежи спесимени, взети по време на аутопсия/биопсия/операция, фиксирани във формалин,
обработени и вградени в парафинов восък, възможно най-бързо, по същия начин като проба(та) на пациента(ите).
Позитивна тъканна контрола
Използва се, за да се покажат правилно приготвени тъкани и правилни техники на оцветяване.
Една позитивна тъканна контрола трябва да бъде включена за всеки сет с тестови условия при всяка серия проби за
оцветяване.
Тъкан със слабо позитивно оцветяване е по-подходяща от тъкан със силно позитивно оцветяване за оптимален качествен
контрол и за откриване на по-малки нива на деградация на реактива.
2
Препоръчителната позитивна тъканна контрола е сливица.
Ако позитивната тъканна контрола не показва позитивно оцветяване, резултатите от спесимените, включени в теста, трябва да
се считат за невалидни.
Негативна тъканна контрола
Трябва да се изследва след позитивната тъканна контрола, за да се провери специфичността на белязването на таргетния
антиген от първичното антитяло.
Препоръчителната тъкан за негативна контрола е език.
Алтернативно, разнообразието от различни видове клетки, присъстващи в повечето тъканни срези, често предлага места за
негативна контрола, но това трябва да се провери от потребителя.
Неспецифичното оцветяване, ако присъства, обикновено е дифузно на вид. Спорадично оцветяване на съединителна
тъкан може да се наблюдава и в части от прекомерно фиксирани във формалин тъкани. Използвайте интактни клетки за
интерпретация на резултатите от оцветяването. Некротичните или дегенериралите клетки често се оцветяват неспецифично.
3
Може да се видят неверни позитивни резултати поради неимунологично свързване на протеини или реакционни продукти
на субстрата. Те може да са причинени и от ендогенни ензими, като например псевдопероксидаза (еритроцити), ендогенна
пероксидаза (цитохром C) или ендогенен биотин (напр. черен дроб, гърда, мозък, бъбрек) в зависимост от типа на използваното
имунно оцветяване. За диференциране на ендогенна ензимна активност или неспецифично ензимно свързване от специфична
имунна реактивност ексклузивно може да се оцветят допълнителни тъкани от пациента, съответно със субстрат-хромоген
или с ензимни комплекси (авидин-биотин, стрептавидин, маркиран полимер) и субстрат-хромоген. Ако се появи специфично
оцветяване в негативната тъканна контрола, резултатите от спесимените на пациентите трябва да се считат за невалидни.
Негативна контрола на реактива
Използвайте неспецифична негативна контрола на реагента, вместо първичното антитяло, със срез от всеки спесимен на
пациента, за да се направи оценка на неспецифичното оцветяване и да се даде по-добра интерпретация на специфичното
оцветяване на мястото на антигена.
Тъкан от пациента
Изследвайте спесимените на пациенти, оцветени последно с NCL-L-CD71-309. Наситеността на позитивното оцветяване
трябва да бъде оценена в контекста на всяко неспецифично фоново оцветяване на негативната контрола на реагента. Както
при всеки имунохистохимичен тест, един отрицателен резултат означава, че антигенът не е открит, а не че антигенът отсъства
в анализираните клетки/тъкан. Ако се налага, използвайте панел от антитела за идентифициране на фалшиво отрицателни
реакции.
Очаквани резултати
Нормални тъкани
Клонинг 10F11 открива протеина CD71 в цитоплазмата (зърнистата) и на мембраната на еритроидните прекурсорни клетки
в костния мозък, епителните клетки в илеума, цекума, ободното черво, правото черво, ендометриума, фалопиевата тръба и
стомаха. Оцветяване се наблюдава също в екзокринните клетки на панкреаса, кортикалните клетки на надбъбречната жлеза,
дисталните бъбречни каналчета, пирамидалните клетки в мозъчната кора, клетките на Пуркиние и кръвоносните съдове в
малкия мозък, кръвоносните съдове в базалните ганглии и невроните в хипокампуса. Той също така оцветява сърдечния
мускул, скелетния мускул, зародишните центрове на сливицата, хепатоцитите, трофобластите на плацентата, алвеоларните
макрофаги и каналите в паротидната жлеза. Наблюдава се оцветяване и при известен процент от лимфоидните клетки в далака
и макрофагите на лимфните възли. (Общ брой на оценените нормални случаи = 56).
Абнормни тъкани
Клонинг 10F11 оцветява 4/4 чернодробни тумора (включително 2/2 хепатоклетъчни карцинома, 1/1 холангиокарцинома и 1/1
метастатичен карцином), 4/4 тумора на яйчниците (включително 1/1 злокачествен тумор на зародишната клетка, 1/1 серозен
цистаденокарцином, 1/1 светлоклетъчен карцином и 1/1 инвазивен плоскоклетъчен карцином), 3/4 белодробни тумора
(включително 1/1 недребноклетъчен карцином, 1/1 плоскоклетъчен карцином, 1/1 едроклетъчен карцином и 0/1 аденокарцином),
2/4 папиларни карцинома на щитовидната жлеза, 2/2 инфилтриращи дуктални карцинома на гърдата, 2/2 стомашни
аденокарцинома, 2/2 плоскоклетъчни карцинома на езика, 2/2 езофагеални плоскоклетъчни карцинома, 2/2 плоскоклетъчни
CD71-309
Page 39