Leica Novocastra CD71 Mode D'emploi page 37

Kalite Kontrol
Kullanıcının laboratuvarındaki doku işleme ve teknik prosedürlerdeki değişiklikler, sonuçlarda önemli farklılıklara neden olabilir ve
aşağıdaki prosedürlere ek olarak dahili kontrollerin düzenli şekilde yapılmasını gerektirir.
Kontroller, mümkün olan en kısa sürede ve hasta örneği (örnekleri) ile aynı şekilde formalinle fikse edilmiş, işlenmiş ve parafin mumuna
gömülmüş taze otopsi/biyopsi/cerrahi numune olmalıdır.
Pozitif Doku Kontrolü
Doğru hazırlanmış dokuları ve düzgün boyama tekniklerini belirtmek için kullanılır.
Bir pozitif doku kontrolü, her boyama çalıştırmasında test koşullarının her seti için dahil edilmelidir.
Optimal kalite kontrol için ve reagent degradasyonunun minör düzeylerini tespit etmek için zayıf pozitif boyamaya sahip bir doku, güçlü
pozitif boyamaya sahip bir dokudan daha uygundur.
2
Önerilen pozitif kontrol dokusu bademciktir.
Pozitif doku kontrolü, pozitif boyamayı göstermezse test numuneleri ile elde edilen sonuçlar geçersiz olarak ele alınmalıdır.
Negatif Doku Kontrolü
Pozitif doku kontrolünden sonra hedef antijenin etiketleme spesifitesini primer antikorla kontrol etmek için gerçekleştirilmelidir.
Önerilen negatif kontrol dokusu dildir.
Pek çok doku seksiyonunda bulunan farklı hücre tiplerinin çeşitliliği, genelde negatif kontrol bölgeleri sağlar ancak bu, kullanıcı
tarafından kontrol edilmelidir. Nonspesifik boyama, mevcutsa genelde difüz bir görünüme sahiptir.
Bağ dokusu sporadik boyama, aşırı formalinle fikse edilmiş dokulardan seksiyonlarda da gözlemlenebilir. Boyama sonuçlarının
yorumlanması için intakt hücreler kullanın. Nekrotik veya dejenere hücreler, genelde belirsiz şekilde boyanabilir.
3
Yanlış pozitif sonuçlar, substrat reaksiyon ürünleri veya proteinlerin immünolojik olmayan protein bağlanması nedeniyle görülebilir.
Bunlar, kullanılan immüno boyamanın tipine bağlı olarak psödoperoksidaz (eritrositler), endojen peroksidaz (sitokrom C) veya endojen
biotin (örn. karaciğer, meme, beyin, böbrek) gibi endojen enzimler nedeniyle de ortaya çıkabilir.
Endojen enzim aktivitesini veya enzimlerin nonspesifik bağlanmasını, spesifik immünreaktiviteden ayırt etmek için ilave hasta dokuları,
sadece sırasıyla substrat kromojen veya enzim kompleksleriyle (avidin biotin, streptavidin, etiketli polimer) ve substrat kromojen ile
boyanabilir. Spesifik boyamanın, negatif doku kontrolünde ortaya çıkması durumunda hasta numuneleri ile elde edilen sonuçlar geçersiz
olarak ele alınmalıdır.
Negatif Reagent Kontrolü
Antijen bölgede nonspesifik boyamanın değerlendirilmesi ve spesifik boyamanın daha iyi yorumlanmasını sağlamak amacıyla her hasta
numunesinin bir seksiyonu ile primer antikorun yerine bir nonspesifik negatif reagent kontrolü kullanın.
Hasta Dokusu
NCL-L-CD71-309 ile boyanan son hasta numunelerini inceleyin. Pozitif boyama intensitesi, negatif reagent kontrolünün herhangi
bir nonspesifik arka plan boyamasının kapsamında değerlendirilmelidir. Herhangi bir immünohistokimyasal test ile negatif bir sonuç,
antijenin tespit edilmediği anlamına gelir; antijenin test edilen hücrelerde/dokuda mevcut olmadığı anlamına gelmez. Gerekiyorsa yanlış
negatif reaksiyonları belirlemek için bir antikor paneli kullanın.
Öngörülen Sonuçlar
Normal Dokular
10F11 klonu, sitoplazmada (granüler) ve kemik iliğinde erittoid prekürsör membranı üzerinde, ileum, çekum, kolon, rektum,
endometriyum, fallop tüpü ve midede epitelyum hücrelerinde CD71 proteinin tespit etti. Pankreasta ekzokrin hücrelerde, böbreküstü
bezi kortikal hücrelerde, böbrek distal tübüllerde, serebral kortekste piramidal hücrelerde, beyincikte Punkinje hücrelerinde ve kan
damarlarında, hipokampta bazal ganglia kan damarları ve nöronlarında boyanma gözlenmiştir. Kardiyak kası, iskelet kası, bademcikte
germinal merkezleri, hepatositler, plasentanın trofoblastlarını, alveolar makrofajları ve parotid bezini de boyamıştır. Boyama dalak ve
lenf nodu makrofajlarında lenfoid hücrelerinin bir kısmında da gözlenmiştir. (Değerlendirilen toplam normal olgu sayısı = 56).
Abnormal Dokular
10F11 klonu 4/4 karaciğer tümörleri (2/2 hepatoselüler karsinom, 1/1 kolanjiokarsinom ve 1/1 metastatik karsinomu içeren), 4/4 over
tümörleri (1/1 malign germ hücresi tümörü, 1/1 seröz sistadenokarsinom, 1/1 berrak hücreli karsinom ve 1/1 invasiv skuamöz hücre
karsinomu içeren), 3/4 akciğer tümörleri (1/1 küçük olmayan hücreli karsinom, 1/1 skuamöz hücre karsinomu, 1/1 büyük hücreli karsinom
and 0/1 adenokarsinom içeren), 2/4 tiroid bezi papiller karsinom, 2/2 infiltre ede duktal meme karsinomu, 2/2 gastrik adenokarsinomu,
2/2 dilde skuamöz hücre karsinomu, 2/2 yemek borusu skuamöz hücre karsinomu, 2/2 serviks skuamöz hücre karsinomu, 2/2 seminom,
2/2 kolonik adenokarsinom, 2/2 rektal adenokarsinom, 1/2 beyin tümörleri (1/1 koroid pleksus papilloma ve 0/1 anaplastik astrositoma
içeren), 1/2 bilinmeyen orijinli metastatik tümörler, 1/2 böbrek hücresi karsinomu, 1/2 cilt tümörleri (1/1 skuamöz hücre karsinomu
ve 0/1 dermatofibrosarkom içeren) ve 1/1 laringeal skuamöz hücre karsinomunu boyadı. Timik tümörlerde (0/1) ve yumuşak doku
tümörlerinde (0/2) boyama gözlenmedi. (Değerlendirilen toplam tümörlü olgu sayısı = 44).
NCL-L-CD71-309, immünolojik olmayan histokimyasal boyamalar kullanılarak yapılan geleneksel histopatolojiye ek olarak
normal ve neoplastik dokularda CD71 proteinin saptanması için önerilir.
Genel Sınırlamalar
İmmünohistokimya uygun reagent'ların seçilmesinde; dokunun seçilmesi, fikse edilmesi ve işlenmesinde; IHC lamının hazırlanmasında
ve boyama sonuçlarının yorumlanmasında uzmanlık eğitimi gerektiren çok adımlı bir diagnostik işlemidir.
Doku boyama, boyamadan önce dokunun ele alınması ve işlenmesine bağlıdır. Diğer dokularla veya akışkanlarla hatalı fikse etme,
dondurma, eritme, yıkama, kurutma, ısıtma, seksiyonlama veya kontaminasyon artefakt, antikor trapping veya yanlış negatif sonuçlar
oluşturabilir. Doku içerisinde fikse etme ve gömme yöntemleri veya inherent aksaklıklar nedeniyle tutarsız sonuçlar ortaya çıkabilir.
4
Aşırı veya inkomplet karşıt boya, sonuçların doğru yorumlanmasına engel olabilir.
CD71-309
Page 36