Leica Novocastra CD71 Mode D'emploi page 58

Kontrola jakosti
Rozdíly ve zpracování tkání a v technických postupech v laboratoři uživatele mohou způsobit významnou variabilitu výsledků, což
vyžaduje kromě níže uvedených postupů i pravidelné provádění kontrol v laboratoři.
Kontroly musí být čerstvé pitevní/bioptické/operační vzorky co nejdříve fixované formalínem, zpracované a zalité do parafínového vosku,
stejným způsobem jako vzorek/vzorky pacienta.
Pozitivní tkáňová kontrola
Používá se k průkazu správně připravených tkání a správných barvicích technik.
V každém barvicím cyklu musí být použita jedna pozitivní tkáňová kontrola pro každý soubor testovacích podmínek.
Pro optimální kontrolu jakosti a k detekci menšího stupně degradace reagencie je vhodnější tkáň se slabým pozitivním barvením než
tkáň se silným pozitivním barvením.
2
Doporučená pozitivní tkáňová kontrola je tonzila.
Pokud pozitivní tkáňová kontrola nevykazuje pozitivní barvení, musí být výsledky testovaných vzorků považovány za neplatné.
Negativní tkáňová kontrola
Musí být vyšetřena po pozitivní tkáňové kontrole k ověření specificity označení cílového antigenu primární protilátkou.
Doporučenou negativní tkáňovou kontrolou je jazyk.
Alternativně často představuje místa negativní kontroly řada různých typů buněk přítomných ve většině tkáňových řezů, to ale musí
uživatel validovat.
Nespecifické barvení, je-li přítomno, má obvykle difúzní vzhled. V řezech ze tkání nadměrně fixovaných formalínem může být také
zjištěno sporadické barvení pojivové tkáně. K interpretaci výsledků barvení použijte neporušené buňky. Nekrotické nebo degenerované
buňky se často barví nespecificky. Falešně pozitivní výsledky mohou být důsledkem neimunologické vazby proteinů nebo produktů
3
reakčního substrátu. Mohou být také způsobeny endogenními enzymy, jako je např. pseudoperoxidáza (erytrocyty), endogenní
peroxidáza (cytochrom C) nebo endogenní biotin (např. játra, prs, mozek, ledviny), podle typu použitého imunobarviva. K odlišení aktivity
endogenních enzymů či nespecifické vazby enzymů od specifické imunoreaktivity mohou být barveny další tkáně pacienta výlučně
chromogenním substrátem, případně enzymovými komplexy (avidin-biotin, streptavidin, značený polymer) a chromogenním substrátem.
Pokud dojde v negativní tkáňové kontrole ke specifickému barvení, musí být výsledky vzorků pacienta považovány za neplatné.
Negativní reagenční kontrola
K vyhodnocení nespecifického barvení a umožnění lepší interpretace specifického barvení v místě antigenu použijte na řezu z každého
vzorku pacienta nespecifickou negativní reagenční kontrolu místo primární protilátky.
Tkáň pacienta
Nakonec vyšetřete vzorky pacienta barvené pomocí NCL-L-CD71-309. Intenzita pozitivního barvení musí být zhodnocena v kontextu
se vším nespecifickým barvením pozadí u negativní reagenční kontroly. Jako u každého imunohistochemického vyšetření, negativní
výsledek znamená, že antigen nebyl zjištěn, nikoli, že antigen není ve vyšetřovaných buňkách/tkáních přítomen. V případě potřeby
použijte k identifikaci falešně negativních reakcí panel protilátek.
Očekávané výsledky
Normální tkáně
Klon 10F11 detekován proteinem CD71 v cytoplazmě (granulární) nebo na membráně prekurzorových buněk erytrocytární řady v kostní
dřeni, epiteliálních buňkách ilea, céka, kolonu, rekta, endometria, vejcovodu a žaludku. Barvení bylo pozorováno také v exokrinních
buňkách pankreatu, kortikálních buňkách nadledviny, distálních tubulech ledviny, pyramidových buňkách mozkové kůry, Purkyňových
buňkách a krevních cévách cerebella, krevních cévách bazálních ganglií a neuronech v hipokampu. Také se zbarvil srdeční sval,
kosterní sval, germinální centra tonsil, hepatocyty, trofoblasty placenty, alveolární makrofágy a dukty v parotidě. Barvení bylo také
pozorováno u části lymfoidních buněk sleziny a makrofágů v lymfatických uzlinách. (Celkový počet normálních vyšetřovaných tkání
= 56).
Abnormální tkáně
Klon 10F11 vedl k barvení 4/4 tumorů jater (včetně 2/2 hepatocelulárních karcinomů, 1/1 cholangiokarcinomu a 1/1 metastatického
karcinomu), 4/4 ovariálních tumorů (včetně 1/1 maligního tumoru z germinálních buněk, 1/1 cystadenokarcinomu, 1/1 karcinomu
ze světlých buněk a 1/1 invazivního spinocelulárního karcinomu), 3/4 tumorů plic (včetně 1/1 nemalobuněčného karcinomu, 1/1
spinocelulárního karcinomu, 1/1 velkobuněčného karcinomu a 0/1 adenokarcinomu), 2/4 papilárních karcinomů štítné žlázy, 2/2
infiltrujících duktálních karcinomů prsu, 2/2 adenokarcinomů žaludku, 2/2 spinocelulárních karcinomů jazyka, 2/2 spinocelulárních
karcinomů jícnu, 2/2 spinocelulárních karcinomů krčku, 2/2 seminomů, 2/2 adenokarcinomů kolonu, 2/2 rektálních adenokarcinomů,
1/2 tumorů mozku (včetně 1/1 papilomu choroidního plexu a 0/1 anaplastického astrocytomu), 1/2 metastatických tumorů neznámého
původu, 1/2 karcinomu z renálních buněk, 1/2 kožních tumorů (včetně 1/1 spinocelulárního karcinomu a 0/1 dermatofibrosarkomu) a
1/1 laryngeálního spinocelulárního karcinomu. Barvení nebylo detekováno u nádorů štítné žlázy (0/1) a nádorů měkkých tkání (0/2).
(Celkový počet vyšetřovaných nádorů = 44).
NCL-L-CD71-309 se doporučuje k detekci proteinu CD71 v normálních a neoplastických tkáních, jako doplněk ke konvenční
histopatologii s použitím neimunologických histochemických nátěrů.
Obecná omezení
Imunohistochemické vyšetření je vícekrokový diagnostický proces, který spočívá ve specializovaném školení ve výběru vhodných
reagencií; výběru, fixaci a zpracování tkání; přípravě imunohistochemickího sklíčka; a v interpretaci výsledků barvení.
Barvení tkáně závisí na manipulaci s tkání a jejím zpracování před barvením. Nesprávným postupem při fixaci, zmrazení, rozmrazení,
omývání, sušení, zahřívání, krájení řezů nebo kontaminací jinými tkáněmi či tekutinami mohou vzniknout artefakty, může dojít k
vychytávání protilátek nebo k falešně negativním výsledkům. Nekonzistentní výsledky mohou být důsledkem odchylek ve fixačních
metodách a metodách zalití, nebo přirozených odchylek ve tkáni. Nadměrné nebo nedostatečné kontrastní barvení může narušit
4
správnou interpretaci výsledků.
Klinickou interpretaci jakéhokoliv barvení nebo jeho nepřítomnosti je nutné doplnit morfologickým vyšetřením s použitím správných
kontrol a zhodnotit je musí kvalifikovaný patolog v kontextu s klinickou anamnézou pacienta a jinými diagnostickými testy.
CD71-309
Page 57