Leica Novocastra CD71 Mode D'emploi page 61

Kontrola kvality
Rozdiely v spracovaní tkaniva a technických postupoch v laboratóriu používateľa môžu viesť k významnému kolísaniu výsledkov, čo si
vyžaduje, okrem nasledujúcich postupov, aj pravidelné interné kontroly.
Kontroly by mali byť čerstvé pitevné/bioptické/chirurgické vzorky fixované čo najskôr formalínom a spracované zaliatím do parafínu
rovnakým spôsobom ako vzorky pacienta.
Pozitívna kontrola tkanivom
Identifikuje správne pripravené tkanivá a správne techniky zafarbenia.
Každá súprava testových podmienok v každom cykle zafarbenia musí obsahovať jednu pozitívnu kontrolu tkanivom.
Tkanivo so slabým pozitívnym farbením je pre optimálnu kontrolu kvality a na detekciu slabšej degradácie činidla vhodnejšie než tkanivo
so silným pozitívnym farbením.
2
Odporúčané tkanivo na pozitívnu kontrolu je tonzila.
Ak pozitívna kontrola tkanivom nebude vykazovať pozitívne zafarbenie, výsledky testovaných vzoriek je nutné považovať za neplatné.
Negatívna kontrola tkanivom
Nutné vyšetriť po pozitívnej kontrole tkanivom s cieľom overiť špecificitu značenia cieľového antigénu primárnou protilátkou.
Odporúčané tkanivo na negatívnu kontrolu je jazyk.
Ako negatívnu kontrolu je možné použiť aj rôzne typy buniek prítomné vo väčšine tkanivových rezov, takýto postup si však vyžaduje
validáciu používateľom.
Prípadné nešpecifické farbenie má obvykle difúzny vzhľad. V rezoch tkanív silne fixovaných formalínom môže byť pozorované
sporadické farbenie spojiva. Na interpretáciu výsledkov farbenia používajte intaktné bunky. Nekrotické alebo degenerované bunky
sa často farbia nešpecificky. Falošne pozitívne výsledky môžu byť pozorované v dôsledku neimunologickej väzby proteínov alebo
3
produktov reakcie substrátu. Môžu byť spôsobené aj endogénnymi enzýmami, ako napr. pseudoperoxidázou (erytrocyty), endogénnou
peroxidázou (cytochróm C) alebo endogénnym biotínom (napr. pečeň, prsník, mozog, oblička) v závislosti od typu imunologického
farbenia. S cieľom diferencovať endogénnu enzymatickú aktivitu alebo nešpecifickú väzbu enzýmov od špecifickej imunoreaktivity
môžete nafarbiť ďalšie vzorky tkanív pacienta výhradne substrátovým chromogénom alebo enzymatickými komplexmi (avidín-biotín,
streptavidín, značený polymér), resp. substrátovým chromogénom. V prípade špecifického farbenia v negatívnej kontrole tkanivom je
nutné výsledky vzoriek pacienta považovať za neplatné.
Negatívna kontrola činidlom
Na vyhodnotenie nešpecifického zafarbenia použite nešpecifickú negatívnu kontrolu činidlom miesto primárnej protilátky s rezom
jednotlivých vzoriek pacienta, čo umožní lepšiu interpretáciu špecifického farbenia na mieste antigénu.
Tkanivo pacienta
Pacientske vzorky zafarbené prípravkom NCL-L-CD71-309 preskúmajte ako posledné. Intenzitu pozitívneho farbenia je nutné vyhodnotiť
v kontexte prípadného
nešpecifického zafarbenia negatívnej kontroly činidlom na pozadí. Podobne ako pri všetkých imunohistochemických testov znamená
negatívny výsledok, že antigén nebol detegovaný. Nepotvrdzuje jeho absenciu v testovaných bunkách/tkanivách. V prípade potreby
identifikujte falošne negatívne reakcie pomocou panelu protilátok.
Očakávané výsledky
Normálne tkanivo
Klon 10F11 detegoval proteín CD71 cytoplazme (granulovanej) a na membráne erytroidných prekurzorových buniek v kostnej dreni,
v epitelových bunkách ilea, slepého čreva, hrubého čreva, konečníka, endometria, vajíčkovodov a žalúdka. Zafarbenie bolo takisto
pozorované v exokrinných bunkách pankreasu, bunkách kôry nadobličiek, distálnych kanálikoch obličiek, pyramídových bunkách v
mozgovej kôre, Purkyňových bunkách a krvných cievach mozočka, krvných cievach bazálnych ganglií a neurónoch v hipokampe.
Zafarbil aj srdcový sval, kostrové svalstvo, zárodočné centrá tonzíl, hepatocyty, trofoblasty placenty, alveolárne makrofágy a kanáliky
príušnej žľazy. Zafarbenie bolo takisto pozorované v určitom percente lymfoidných buniek v slezine a makrofágov lymfatických uzlín.
(Celkový počet normálnych vyšetrených prípadov = 56).
Abnormálne tkanivá
Klon 10F11 zafarbil 4/4 nádorov pečene (vrátane 2/2 hepatocelulárnych karcinómov, 1/1 cholangiokarcinómu a 1/1 metastatického
karcinómu), 4/4 nádorov vaječníkov (vrátane 1/1 malígneho nádoru zárodočných buniek, 1/1 serózneho cystadenokarcinómu, 1/1
karcinómu zo svetlých buniek a 1/1 invazívneho skvamocelulárneho karcinómu), 3/4 nádorov pľúc (vrátane 1/1 nemalobunkového
karcinómu, 1/1 skvamocelulárneho karcinómu, 1/1 veľkobunkového karcinómu a 0/1 adenokarcinómu), 2/4 papilárnych karcinómov
štítnej žľazy, 2/2 infiltrujúcich duktálnych karcinómov prsníka, 2/2 adenokarcinómov žalúdka, 2/2 skvamocelulárnych karcinómov
jazyka, 2/2 skvamocelulárnych karcinómov pažeráka, 2/2 skvamocelulárnych karcinómov krčka maternice, 2/2 seminómov, 2/2
adenokarcinómov hrubého čreva, 2/2 adenokarcinómov konečníka, 1/2 nádorov mozgu (vrátane 1/1 papilómu plexus choroideus a 0/1
anaplastického astrocytómu), 1/2 metastatických nádorov neznámeho pôvodu, 1/2 karcinómov renálnych buniek, 1/2 nádorov kože
(vrátane 1/1 skvamocelulárneho karcinómu a 0/1 dermatofibrosarkómu) a 1/1 skvamocelulárneho karcinómu hrtana. Pri nádoroch
týmusu (0/1) a nádoroch mäkkých tkanív (0/2) nebolo pozorované žiadne zafarbenie. (Celkový počet vyšetrených nádorov = 44).
NCL-L-CD71-309 sa odporúča na detekciu proteínu CD71 v normálnych a neoplastických tkanivách ako doplnok konvenčnej
histopatológie za použitia neimunologických histochemických farbení.
Všeobecné limitácie
Imunohistochémia je diagnostický postup pozostávajúci z viacerých krokov, ktorý si vyžaduje špecializované zaškolenie vo výbere
zodpovedajúcich činidiel, výbere tkanív, fixácie a spracovania, príprave IHC sklíčka a interpretácii výsledkov farbenia.
Farbenie tkaniva závisí od manipulácie s tkanivom a od jeho spracovania pred farbením. Nesprávna fixácia, zmrazovanie,
rozmrazovanie, premývanie, sušenie, ohrievanie, rezanie alebo kontaminácia inými tkanivami či tekutinami môžu viesť k vzniku
artefaktov, záchytu protilátok alebo falošne negatívnym výsledkom. Inkonzistentné výsledky môžu byť spôsobené zmenami metód
fixácie a montáže preparátov alebo inherentnými nepravidelnosťami v tkanive.
4
Nadmerné alebo neúplné kontrastné farbenie môže narušiť správnosť interpretácie výsledkov.
CD71-309
Page 60