Guide du système HiSeq 2000
Préparer les réactifs appariés
Les réactifs appariés sont utilisés lors de l'étape de resynthèse de la lecture 2 d'une analyse de séquençage
à lecture appariée.
REMARQUE
Les librairies Nextera nécessitent le HP11, un primer de séquençage fourni dans la boîte de primers de
séquençage à index double TruSeq. Toutes les autres librairies nécessitent le HP7.
Décongeler les réactifs appariés
1
Retirez les réactifs suivants de leur lieu de stockage entre -25 °C et -15 °C :
Pour les analyses sans index ou à index simple : AMX2, APM2, AT2, BMX, HP3, HP7 ou HP11, HT2,
u
LMX2 et RMR
Pour les analyses à index double : AMX2, APM2, AT2, BMX, HP3, HP7 ou HP11, HT2 et LMX2
u
Pour les analyses à lectures appariées : HP3
u
2
Décongelez les réactifs dans un bécher rempli d'eau désionisée à température ambiante pendant
environ 20 minutes.
3
Réservez le AMX2, le BMX, le LMX2 et le RMR sur de la glace.
Préparer l'AMX2, l'APM2, l'AT2, le BMX, le HP3, le HP7, le HP11, le HT2 et le LMX2
1
Retournez chaque tube pour en mélanger le contenu.
2
Centrifugez à 1 000 tr/min pendant une minute.
3
Réservez l'AMX2, le BMX, et le LMX2 sur de la glace.
4
Réservez l'APM2, l'AT2, le HP3, le HP7, le HP11 et le HT2 à température ambiante.
Préparer le HP3 pour les analyses à lectures appariées
1
Renversez pour mélanger le contenu, puis passez à la centrifugeuse à impulsions.
2
Transférez 2,85 ml de PW1 dans un tube conique vide de 15 ml, puis ajoutez 150 µl de HP3.
3
Inversez pour mélanger.
4
Centrifugez à 1 000 tr/min pendant une minute.
5
Réservez à température ambiante.
Préparer le RMR
1
Inversez pour mélanger.
2
Centrifugez à 1 000 tr/min pendant une minute. N'agitez pas les tubes.
3
Réservez sur de la glace.
Préparation de l'Illumina Chromosome Browser (ICB) pour la lecture 2
(sans index ou à index simple)
1
Retirez deux tubes de LFN du lieu de stockage maintenu entre -25 °C et -15 °C et faites-les décongeler
dans un bécher contenant de l'eau désionisée à température ambiante pendant environ 20 minutes.
Document nº 15011190 v02 FRA
Destiné à la recherche uniquement. Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
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