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Guide du système HiSeq 2000
3
Ajoutez le volume de LFN mesuré dans le nouveau flacon d'ICB.
4
Rincez chaque tube de LFN avec de l'ICB pour vous assurer que tout le LFN est transféré.
5
Ajoutez le volume d'EDP mesuré à la solution d'ICB et de LFN.
6
Rincez le tube d'EDP avec la solution d'ICB et de LFN pour vous assurer que tout l'EDP est transféré.
7
Mettez le bouchon sur le flacon contenant l'EDP, l'ICB et le FLN et renversez le flacon pour mélanger.
8
Réservez sur de la glace.
Exemple de calcul
Une analyse appariée à index double de 101 cycles comporte 225 cycles au total :
124 cycles (101 + 8 + 7 + 8) pour la lecture 1 et les lectures d'index
u
101 cycles pour la lecture 2
u
Lecture 1 et lectures d'index (124 cycles)
124 cycles / 10 cycles = 12,4
• ICB : 12,4 x 4,57 ml = 56,9 ml
• LFN : 12,4 x 0,6 ml = 7,44 ml
• EDP : 12,4 x 0,11 ml = 1,36 ml
Utilisez le même calcul pour toutes les analyses à index double. Basez le calcul sur le nombre total de cycles
de la lecture 1 et des lectures d'index accrus du nombre total de cycles de la lecture 2. Pour les analyses
appariées à index double, incluez les sept cycles de chimie seulement dans la lecture d'index 2.
Préparer les réactifs d'indexage
Les réactifs d'indexage sont utilisés durant les lectures d'indexage d'une analyse de séquençage indexée.
Préparez les réactifs appropriés selon le type d'analyse et le type de librairie.
Type d'analyse
Index simple
Appariée à Index double
Lecture unique à index double
* Le primer est fourni dans la boîte de primers de séquençage à index double TruSeq.
Décongeler les réactifs d'indexage
1
Retirez les réactifs suivants de leur lieu de stockage entre -25 °C et -15 °C :
Pour toutes les analyses d'indexage : HP3, HP14 ou HP8, et HT2
u
Pour les analyses à index double sur une Flow Cell à lecture unique : HP9
u
Pour les analyses à index double sur une Flow Cell appariée : RMR
u
2
Décongelez les réactifs dans un bécher rempli d'eau désionisée à température ambiante pendant
environ 20 minutes.
Document nº 15011190 v02 FRA
Destiné à la recherche uniquement. Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
Lecture 2 (101 cycles)
101 cycles / 10 cycles = 10
• ICB : 10 x 4,57 ml = 45,7 ml
• LFN : 10 x 0,6 ml = 6 ml
• EDP : 10 x 0,11 ml = 1,1 ml
Type de librairie
Toutes les librairies sauf Nextera
Librairies Nextera
Toutes les librairies sauf Nextera
Librairies Nextera
Toutes les librairies sauf Nextera
Librairies Nextera
Index 1 (i7)
Index 2 (i5)
HP8
--
HP14*
--
HP8
RMR
HP14*
RMR
HP8
HP9*
HP14*
HP9*
34
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