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Guide du système HiSeq 2000
4
Réservez le SRE sur de la glace. Réservez séparément le CMR sur de la glace afin d'éviter la
contamination croisée.
5
Retirez le LFN de son lieu de stockage entre -25 °C et -15 °C :
Pour la trousse SBS de 50 cycles : retirez un tube.
u
Pour la trousse SBS de 200 cycles : retirez deux tubes.
u
6
Décongelez le LFN dans un bécher rempli d'eau désionisée à température ambiante pendant environ
20 minutes.
7
Utilisez l'ICB, le SB1, le SB2 et le SB3 sortant directement du lieu de stockage maintenu entre
2 °C et 8 °C.
Préparer l'ICB pour la lecture 1 (sans index ou à index simple) (trousse de 50 cycles)
1
Ajoutez le contenu d'un tube de LFN au flacon d'ICB.
2
Rincez le tube de LFN avec de l'ICB pour vous assurer que tout le LFN est transféré.
3
Ajoutez le contenu du tube d'EDP à la solution d'ICB et de LFN.
4
Rincez le tube d'EDP avec un mélange d'ICB et de LFN pour vous assurer que tout l'EDP est transféré.
5
Mettez le bouchon sur le flacon contenant l'EDP, l'ICB et le FLN et renversez le flacon pour mélanger.
6
Réservez sur de la glace.
Préparer l'ICB pour la lecture 1 (sans index ou à index simple) (trousse de
200 cycles)
1
Ajoutez 47 ml d'ICB dans un flacon vide de 250 ml pour obtenir deux flacons d'ICB.
2
Réservez le flacon contenant 47 ml d'ICB pour la lecture 2, entre 2°C et 8°C.
3
Ajoutez le contenu de deux tubes de LFN au flacon d'ICB initial.
4
Rincez chaque tube de LFN avec de l'ICB pour vous assurer que tout le LFN est transféré.
5
Ajoutez 1,1 ml d'EDP à la solution d'ICB et de LFN.
6
Replacez l'EDP inutilisé dans son lieu de stockage, entre -25 °C et -15 °C.
7
Mettez le bouchon sur le flacon contenant l'EDP, l'ICB et le FLN et renversez le flacon pour mélanger.
8
Réservez sur de la glace.
Préparer l'ICB pour la lecture 1 (index double)
Suiviez les directives ci-dessous pour calculer et préparer le volume d'ICB nécessaire pour la lecture 1 d'une
analyse à index double.
1
Mesurez les volumes suivants d'EDP, d'ICB et de LFN pour chaque tranche de 10 cycles de séquençage
devant être effectuée à la lecture 1.
Réactif
Volume pour 10 cycles
ICB
4,57 ml
LFN
0,6 ml
EDP
0,11 ml
2
Transférez le volume d'ICB mesuré dans un flacon de 250 ml.
Document nº 15011190 v02 FRA
Destiné à la recherche uniquement. Ne pas utiliser dans le cadre d'examens diagnostiques.
Stockage
2 à 8 °C
-25 à -15 °C
-25 à -15 °C
33
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