BD MAX System Manuel D'utilisation page 130

Manuel de l'utilisateur du BD MAX™ System
La ligne de seuil, accessible dans la vue agrandie des longueurs d'onde configurée sur PCR
normalisée générée, peut être utilisée pour différencier les courbes d'amplification corrigées
normalisées générées positives de celles négatives. En cas d'utilisation de la valeur Ct au point
d'inflexion, une valeur Ct est attribuée à l'échantillon en fonction de l'algorithme logiciel uniquement
lorsque la courbe d'amplification normalisée corrigée possède une fluorescence au point final
supérieure à la valeur de seuil. En cas d'utilisation de la valeur Ct au croisement du seuil, une valeur
Ct est attribuée à l'échantillon en fonction de l'endroit où la courbe d'amplification normalisée corrigée
croise la ligne de seuil. En cas d'utilisation de la valeur Résultat Ct au croisement du seuil avec un
seuil de CQ secondaire, une valeur Ct est attribuée à l'échantillon en fonction de l'endroit où la courbe
d'amplification normalisée corrigée croise la ligne de seuil, mais uniquement si la fluorescence est
supérieure au seuil de CQ secondaire.
Une valeur Ct de -1 indique un état négatif. Une valeur Ct de 0 indique que la courbe a croisé la ligne
de seuil à plusieurs reprises et aucun résultat n'est fourni. Une inspection manuelle des courbes
d'amplification est nécessaire pour les protocoles maison afin d'identifier l'état positif ou négatif.
Pour ajuster le seuil d'intensité ou le calcul de Ct
1 La méthode de seuil et de calcul des valeurs Ct ne peut être ajustée que pour les tests en
Système Ouvert.
2 Sélectionner le test et la longueur d'onde souhaités comportant des boutons « Longueur
d'onde ». Sélectionner les données normalisées et cliquer sur le graphique pour l'agrandir et
activer les commandes de calcul des valeurs Ct et d'ajustement du seuil. Chaque test et
longueur d'onde doit être recalculé séparément.
3 Dans le graphique agrandi, le champ Seuil (au milieu à droite du graphique) affiche
initialement NA. Pour changer la méthode de calcul des valeurs Ct, cliquer sur le bouton
Calculer Ct et sélectionner une autre méthode dans la fenêtre contextuelle. Pour modifier le
seuil, mettre en surbrillance la valeur du champ, saisir un nouveau seuil et cliquer sur la
touche « Tab » ou « Entrée », ou bien sur le bouton « + » ou « - » pour augmenter ou diminuer
la valeur et déplacer la ligne bleue de seuil.
4 Pour recalculer les valeurs Ct, cliquer sur le bouton « Appliquer seuil », en bas à droite de
l'écran. Les valeurs Ct sont recalculées et toute ligne de seuil antérieure devient gris foncé.
Pour annuler le recalcul, cliquer sur le bouton « Annuler seuil ». Le seuil reprend sa valeur
précédente (ou NA s'il s'agit du recalcul initial).
Noter que si la case à cocher « Utiliser Cts recalculés ? » est activée dans l'écran Analyse de
quantification pour recalculer des concentrations, la ligne de seuil est grisée dans
l'analyse PCR et ne peut pas être déplacée tant que la case à cocher n'est pas désactivée.
5 Si le nouveau seuil change la valeur Ct calculée par l'algorithme spécifique, la valeur mise à
jour apparaît alors sous la valeur Ct d'origine avec la mention « R » (pour recalculée).
130