BD MAX System Manuel D'utilisation page 10

Manuel de l'utilisateur du BD MAX™ System
Pour démarrer le processus, l'instrument transfère un volume fixe de l'échantillon préparé dans le
tube d'extraction afin de réhydrater les réactifs d'extraction. Après la réhydratation, le mélange est
transféré dans le tube réactionnel. Le cas échéant, de la chaleur est appliquée au tube réactionnel
et les cellules de l'échantillon sont lysées, libérant ainsi l'ADN/ANT. L'ADN/ANT présent dans
l'échantillon est lié aux billes magnétiques qui ont été enduites d'une matrice d'affinité d'acide
nucléique brevetée. La barre magnétique est relevée afin d'immobiliser l'ADN/ANT lié aux billes
magnétiques. Le surnageant présent dans le tube est aspiré. La barre magnétique est abaissée,
ce qui déclenche la libération des billes magnétiques. Le tampon de lavage de l'ADN/ANT est
ajouté au tube afin d'éliminer toute matière non spécifiquement liée. La barre magnétique est
relevée, immobilisant ainsi l'ADN/ANT lié aux billes magnétiques. Le surnageant est éliminé du
tube et la barre magnétique est abaissée. Le tampon d'élution de l'ADN/ANT est ajouté au tube
réactionnel, qui est alors chauffé pour libérer les acides nucléiques liés aux billes magnétiques.
La barre magnétique est relevée, immobilisant ainsi les billes. L'ADN/ANT libéré est transféré du
tube réactionnel à la position du tube à clipser 3 de la barrette réactive unitarisée, où il est alors
préparé pour l'analyse PCR.
Échantillon
Mélanger
Lyse et
les réactifs
liaison
Extraction de l'ARN
Le processus d'extraction de l'ARN est très semblable à celui d'extraction de l'ADN/ANT. Il est
présenté schématiquement à la Figure 1-2.
La lyse de l'échantillon et l'extraction de l'ARN sont effectuées dans chaque barrette réactive
unitarisée. Les flèches rouges représentent la chaleur appliquée au tube réactionnel par le module
du bloc chauffant. La case grise et rouge (libellée NS) représente une barre magnétique abaissée
et relevée pour s'approcher du tube réactionnel de chaque barrette réactive unitarisée chargée
dans le portoir d'échantillons.
Pour démarrer le processus, l'instrument transfère un volume fixe de l'échantillon préparé dans le
tube d'extraction afin de réhydrater les réactifs d'extraction. Après la réhydratation, le mélange est
transféré dans le tube réactionnel. De la chaleur est appliquée au tube réactionnel et les cellules
de l'échantillon sont lysées, libérant ainsi l'ARN. L'ARN présent dans l'échantillon se lie aux billes
magnétiques enduites d'une matrice d'affinité d'ARN brevetée. La barre magnétique est relevée
afin d'immobiliser l'acide nucléique lié aux billes magnétiques. Le surnageant présent dans le tube
est aspiré. La barre magnétique est abaissée, ce qui déclenche la libération des billes
magnétiques. La solution DNase est ajoutée au tube afin de dégrader l'ADN présent. La barre
magnétique est relevée, immobilisant ainsi l'ARN lié aux billes magnétiques. Le surnageant est
éliminé du tube et la barre magnétique est abaissée. Le tampon de lavage de l'ARN est ajouté au
10
Lavage des
Concentrer
billes
les billes et
éliminer le
surnageant
Figure 1-1 – Extraction de l'ADN/ANT
ADN/ANT prêt
pour la PCR
Incuber avec
Pipeter l'acide
le tampon
nucléique
d'élution de
libéré
l'ADN/ANT
Transfert de
l'ADN/ANT
dans la position
enclenchable 3