Mesure De La Fluorescence - Waters ACQUITY Premier Manuel D'utilisation Et De Maintenance

position du second. Ce type de fonctionnement est nécessaire lors du dosage de mélanges ou
de l'analyse de structures chimiques.
2.1.1.4 Excitation de l'échantillon
La large bande de lumière de forte intensité émise par la lampe traverse un filtre ou un
monochromateur, qui sélectionne une bande étroite de longueurs d'onde. Cette étroite bande de
lumière est ensuite dirigée vers la cellule de détection dans laquelle elle excite les analytes. Les
longueurs d'onde d'excitation correspondent souvent aux longueurs d'onde d'absorbance de
l'analyte.
2.1.1.5 Cellule de détection
La cellule de détection en quartz réduit la quantité de lumière parasite susceptible de gêner la
mesure et maximise le signal de fluorescence. Le compartiment à échantillons est disposé pour
recueillir l'énergie de fluorescence selon une direction perpendiculaire au faisceau d'excitation
provenant de la lampe. Cette disposition limite l'effet de diffusion Rayleigh sur les niveaux de
lumière d'arrière-plan.
2.1.1.6 Bloc de la cuvette
Équipé de la lampe Hg/Xe, le détecteur FLR ACQUITY Premier atteint une sensibilité plus élevée
que les systèmes de fluorimétrie traditionnellement utilisés en chromatographie liquide haute
performance (HPLC). Le nouveau profil énergétique peut cependant nécessiter de décaler
sensiblement le spectre d'excitation des analytes pour les faire correspondre aux bandes de la
lampe Hg/Xe. Les méthodes de détection HPLC traditionnelles doivent pour cela être optimisées
pour pouvoir être utilisées avec ce détecteur. Les valeurs optimisées peuvent être déterminées
en balayant les plages de longueur d'onde d'excitation et d'émission avec le bloc de la cuvette et
en examinant les spectres résultants dans la console du détecteur ou dans le logiciel Empower.
Utilisez pour cela la fonction Spectrum λ-λ plot (Tracé du spectre λ-λ).

2.1.2 Mesure de la fluorescence

Pour mesurer la fluorescence dans la cellule de détection, le détecteur doit trouver un équilibre
entre une sélectivité élevée, qui permet de différencier les longueurs d'onde de fluorescence très
spécifiques, et une sensibilité élevée, qui permet de mesurer les intensités des faibles
fluorescences.
2.1.2.1 Analyse quantitative
La fluorescence varie linéairement à des concentrations faibles, mais elle peut perdre ce
caractère linéaire pour des concentrations élevées.
2.1.2.2 Sélection de la longueur d'onde d'émission
La longueur d'onde d'émission est sélectionnée au moyen d'un monochromateur.
10 novembre 2021, 715006949FR Version 01
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