Principes De Fonctionnement; Théorie De La Fluorescence - Waters ACQUITY Premier Manuel D'utilisation Et De Maintenance

2 Principes de fonctionnement

Cette section explique les principes et la technologie à la base du fonctionnement de
l'instrument.
2.1 Théorie de la fluorescence
La fluorescence se produit après l'absorption par certaines molécules de la lumière à des
longueurs d'onde spécifiques, les faisant passer ainsi à un état énergétique supérieur, dit
« excité ». Ces molécules retournent à leur état énergétique normal en libérant l'énergie
absorbée sous forme de photons.
De nombreux composés organiques absorbent la lumière, mais peu émettent par fluorescence.
Les systèmes de chromatographie liquide (LC) utilisant une détection de la fluorescence
identifient avec succès les hydrocarbures polyaromatiques, les aflatoxines, les vitamines, les
acides aminés, etc. Les méthodes de dérivation chimique permettent d'étendre la technique de
détection de la fluorescence à certains composés non fluorescents tels que les pesticides de
type carbamates.
La détection de la fluorescence requiert à la fois les longueurs d'onde d'excitation et d'émission
pour atteindre un niveau de sensibilité supérieur. Cette technique s'avère ainsi utile pour les
analyses nécessitant des limites de détection basses.
Certaines conditions peuvent interférer avec la capacité de fluorescence d'un composé et par
conséquent diminuer les performances analytiques :
• Variations de pH : la perte, ou le gain, de protons et l'augmentation, ou la diminution, de la
charge dont ils s'accompagnent modifient la structure électronique d'un analyte et peuvent
ainsi augmenter, ou réduire, la fluorescence.
• Variations de température : la fluorescence diminue à mesure qu'augmente la température de
l'échantillon.
• Changements de la quantité d'oxygène dissous : la fluorescence de certaines molécules est
étouffée (diminuée) par la présence d'oxygène dissous.
Les détecteurs de fluorescence peuvent être adaptés pour mesurer la chimiluminescence, soit la
capacité d'une molécule à émettre un signal de faible intensité sans être exposée à une énergie
excitatrice. Ce type de détection nécessite de désactiver la source lumineuse ou, dans le cas du
détecteur FLR, d'empêcher, à l'aide d'un obturateur, la lumière excitatrice d'atteindre la cellule de
détection.
Le procédé de détection de la fluorescence implique une source d'excitation et les processus
suivants :
10 novembre 2021, 715006949FR Version 01
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