Leica Novocastra CD20 Mode D'emploi page 43

A megadottaktól eltérő inkubációs idők és hőmérsékletek hibás eredményekhez vezethetnek. A felhasználónak minden ilyen jellegű
változtatást validálnia kell.
Minőség-ellenőrzés
A felhasználó laboratóriumában alkalmazott szövetfeldolgozási és technikai eljárások eltérései jelentős különbséget okozhatnak az
eredményekben, ami az alábbi eljárásokon túl belső kontrollok rendszeres futtatását teszi szükségessé.
Kontrollként friss boncolási/biopsziás/sebészeti mintákat kell használni, amelyeket a lehető leghamarabb a betegmintákkal megegyező
módon kell formalinban fixálni, feldolgozni és paraffinviaszba ágyazni.
Pozitív szövetkontroll
A megfelelő szövet-előkészítés és festési technikák ellenőrzésére használatos.
Minden tesztelési körülményegyüttes esetében és minden megfestési sorozatban kell alkalmazni egy pozitív szövetkontrollt.
A gyengén pozitív festődésű szövet alkalmasabb az erősebben pozitív festődésű szövetnél az optimális minőség-ellenőrzéshez,
valamint a kismértékű reagensbomlás észleléséhez.
2
A javasolt pozitív kontrollszövet a tonsilla.
Ha a pozitív szövetkontroll nem mutat pozitív festődést, a vizsgált minták eredményeit érvénytelennek kell tekinteni.
Negatív szövetkontroll
A pozitív szövetkontroll után azért kell megvizsgálni, hogy a vizsgált antigén elsődleges antitest segítségével történő jelölésének
specificitását ellenőrizni lehessen.
A javasolt negatív kontrollszövet a kisagy.
Ezenkívül a legtöbb szövetmetszetben jelen lévő különböző sejttípusok gyakran használhatók negatív kontrollként, de ezeket a
felhasználónak kell ellenőriznie.
Ha van nem specifikus festődés, az rendszerint diffúz megjelenésű. A formalinban túlfixált szövetekből származó metszeteknél a
kötőszövet szórványos festődése is megfigyelhető. A festési eredmények értelmezésére ép sejteket használjon. A nekrotizált vagy
degenerálódott sejtek gyakran nem specifikusan festődnek meg. A fehérjék vagy a szubsztrát reakciótermékeinek nem immunológiai
3
kötődése miatt álpozitív eredmények jelentkezhetnek. Az alkalmazott immunfestés típusától függően álpozitív eredményeket okozhatnak
olyan endogén enzimek is, mint a pszeudoperoxidáz (vörösvérsejtek), endogén peroxidáz (citokróm C), illetve endogén biotin (pl. máj,
emlő, agy, vese). Az endogén enzim aktivitásának vagy az enzimek nem specifikus kötődésének a specifikus immunreakciótól való
megkülönböztetésére további betegszövetek festhetők kizárólag szubsztrát–kromogén oldattal vagy enzimkomplexekkel (avidin-
biotin, sztreptavidin, jelölt polimer) és szubsztrát–kromogénnel. Ha a negatív szövetkontroll specifikus festődést mutat, a betegminták
eredményeit érvénytelennek kell tekinteni.
Negatív reagenskontroll
A nem specifikus festődés kiértékeléséhez és az antigén helyén létrejövő specifikus festődés jobb értelmezéséhez minden betegminta
esetén egy metszeten alkalmazzon az elsődleges antitest helyett nem specifikus negatív reagenskontrollt.
Betegszövet
Az NCL-L-CD20-L26 reagenssel festett betegmintákat vizsgálja meg utolsóként. A pozitív festődés intenzitását a negatív reagenskontroll
esetleges nem specifikus háttérfestődésének viszonylatában értékelje. Mint minden immunhisztokémiai vizsgálatnál, a negatív
eredmény azt jelenti, hogy az antigén nem volt kimutatható, nem pedig azt, hogy az antigén nem volt jelen a vizsgált sejtekben/
szövetben. Szükség esetén az álnegatív reakciók azonosítására használjon antitestpanelt.
Várható eredmények
Normál szövetek
Az L26 klón kimutatja a CD20 antigént, ami a B-sejtvonal sejtjeinek felszínén található, a plazmasejtek kivételével. (Vizsgált normál
esetek összesített száma = 96).
Kóros szövetek
Az L26 klón megfestett 105/106 diffúz nagy B-sejtes limfómát, 11/11 follikuláris limfómát, 10/11 krónikus limfocitás limfómát, 2/11
Hodgkin-limfómát, 7/7 köpenysejtes limfómát, 1/1 B-sejtes akut limfoblasztos limfómát és 1/1 margináliszóna-limfómát. A B-sejtek
megfestődésén kívül nem volt festődés látható a T-sejtes anaplasztikus nagysejtes limfómák (0/7), angioimmunoblasztos T-sejtes
limfómák (0/4), T/NK-sejtes limfómák (0/3), perifériás T-sejtes limfóma (0/1), T-sejtes limfóma (0/1), primitív B/T-sejtes akut limfoblasztos
limfóma (0/1), agydaganatok (0/2), nyelőcsődaganatok (0/2), gégedaganat (0/1), csecsemőmirigy-daganat (0/1), pajzsmirigydaganatok
(0/4), emlődaganatok (0/2), gyomordaganatok (0/2), lágyszöveti daganatok (0/2), nyelvdaganatok (0/2), tüdődaganatok (0/4), ismeretlen
eredetű áttétes daganatok (0/2), májdaganatok (0/4), vesedaganatok (0/2), petefészek-daganatok (0/4), méhnyakdaganatok (0/2),
heredaganatok (0/2), vastagbéldaganatok (0/2), végbéldaganatok (0/2) és bőrdaganatok (0/2) esetén. (Vizsgált tumoresetek összesített
száma = 209.)
Az NCL-L-CD20-L26 alkalmazása a B-sejt eredetű rendellenességek jellemzésére szolgáló antitestpanel részeként javasolt.
Általános korlátozások
Az immunhisztokémia több lépésből álló diagnosztikai folyamat, amely a következőket foglalja magában: speciális képzés alapján a
megfelelő reagensek kiválasztása; a szövetek kiválasztása, fixálása és feldolgozása; az IHC tárgylemez előkészítése; és a festési
eredmények értelmezése.
A szövet festődése függ a szövet festés előtti kezelésétől és feldolgozásától. A nem megfelelő fixálás, a fagyasztás, olvasztás, mosás,
szárítás, melegítés, metszetkészítés, illetve a más szövetekkel vagy folyadékokkal történő szennyezés műtermékeket, az antitestek
befogását, illetve álnegatív eredményeket okozhat. Ellentmondó eredményekhez vezethetnek a fixálási vagy beágyazási módszerek
eltérései, illetve a szövet eredendő rendellenességei.
4
A túlzott vagy hiányos kontrasztfestés ronthatja az eredmények megfelelő értelmezését.
Minden festődés meglétének vagy hiányának klinikai értelmezését morfológiai vizsgálatokkal és megfelelő kontrollokkal kell kiegészíteni,
valamint az értékelést a beteg klinikai kórtörténete és egyéb diagnosztikai vizsgálatok figyelembevételével, képzett patológusnak kell
elvégeznie.
CD20-L26-L-CE
Page 42