Leica Novocastra CD20 Mode D'emploi page 46

Timpii sau temperaturile de incubație care diferă de valorile specificate pot genera rezultate eronate. Orice astfel de modificări trebuie
validate de către utilizator.
Controlul calității
Diferențele în ceea ce privește procesarea țesutului și procedurile tehnice în laboratorul utilizatorului pot cauza o variabilitate
semnificativă a rezultatelor, necesitând efectuarea cu regularitate de controale interne, în plus față de următoarele proceduri.
Probele de control trebuie să fie probe proaspete de autopsie/biopsie/chirurgicale, fixate în formalină, procesate și încorporate în ceară
de parafină cât mai curând posibil și în aceeași manieră ca și probele pacientului.
Țesutul de control pozitiv
Folosit pentru a indica țesuturile pregătite corect și tehnicile de colorare adecvate.
O probă de țesut de control pozitiv trebuie să fie inclusă pentru fiecare set de condiții de testare în fiecare etapă de colorare.
Un țesut cu colorare pozitivă slabă este mai adecvat decât un țesut cu colorare pozitivă puternică în vederea unui control optim al
calității și pentru a detecta nivelurile minore de degradare a reactivului.
2
Țesutul de control pozitiv recomandat este de amigdale.
Dacă țesutul de control pozitiv nu demonstrează colorația pozitivă, rezultatele obținute cu acele probe de testare trebuie considerate
nevalide.
Țesutul de control negativ
Trebuie examinat după țesutul de control pozitiv pentru a verifica specificitatea informațiilor de etichetare ale antigenului țintă în funcție
de anticorpul primar.
Țesutul de control negativ recomandat este cerebelul.
Ca alternativă, varietatea de tipuri diferite de celule prezente în majoritatea secțiunilor tisulare oferă frecvent locuri de control negativ, dar
acest lucru trebuie verificat de către utilizator.
Colorația nespecifică, dacă este prezentă, are, de obicei, un aspect difuz. Colorația sporadică a țesutului conjunctiv poate fi observată,
de asemenea, în secțiuni de țesuturi fixate în mod excesiv în formalină. Folosiți celule intacte pentru interpretarea rezultatelor de
colorare. Celulele necrotice sau degenerate se colorează deseori într-un mod nespecific. Se pot observa rezultate fals pozitive ca
3
urmare a legării non-imunologice a proteinelor sau produșilor de reacție ai substratului. Acestea pot fi cauzate, de asemenea, de
enzimele endogene precum pseudoperoxidaza (eritrocite), peroxidaza endogenă (citocromul C) sau biotina endogenă (de exemplu,
ficat, sân, encefal, rinichi), în funcție de tipul de imunocolorație folosit. Pentru a diferenția activitatea enzimelor endogene sau legarea
nespecifică a enzimelor de imunoreactivitatea specifică, pot fi colorate țesuturi suplimentare de la pacient numai cu substrat-cromogen
sau, respectiv, complexe enzimatice (avidină-biotină, streptavidină, polimer etichetat) și substrat-cromogen. În cazul în care colorația
specifică are loc în țesutul de control negativ, rezultatele obținute pe probele pacientului trebuie să fie considerate nevalide.
Reactivul de control negativ
Folosiți un reactiv de control negativ non-specific în locul anticorpului primar cu o secțiune din fiecare specimen al pacientului pentru a
evalua colorația nespecifică și a permite o mai bună interpretare a colorării specifice la situl antigenului.
Țesutul pacientului
Examinați specimenele pacientului colorate cu NCL-L-CD20-L26 ultimele. Intensitatea colorației pozitive trebuie evaluată în contextul
oricărei colorații de fond nespecifice a reactivului de control negativ. La fel ca în cazul oricărui test imunohistochimic, un rezultat negativ
înseamnă că antigenul nu a fost detectat, și nu că antigenul a fost absent în celulele/țesuturile analizate. Dacă este necesar, folosiți un
panel pentru anticorpi pentru identificarea reacțiilor fals negative.
Rezultate așteptate
Țesuturi normale
Clona L26 detectează antigenul CD20 pe suprafața celulară a celulelor din linia de celule B, cu excepția celulelor plasmatice. (Numărul
total al cazurilor normale evaluate = 96).
Țesuturi anormale
Clona L26 a colorat 105/106 limfoame difuze cu celule B mari, 11/11 limfoame foliculare, 10/11 limfoame limfocitare cronice, 2/11 boala
lui Hodgkin, 7/7 limfoame cu celule de manta, 1/1 limfom limfoblastic acut cu celule B și 1/1 limfom de zonă marginală. Cu excepția
celulelor B reactive, nu a fost observată vreo colorare în limfoame anaplastice cu celule T mari (0/7), limfoame angioimunoblastice cu
celule T (0/4), limfoame cu celule T/NK (0/3), un limfom periferic cu celule T (0/1), un limfom cu celule T (0/1), un limfom limfoblastic
acut cu celule B/T primitive (0/1), tumori cerebrale (0/2), tumori ale esofagului (0/2), tumori ale laringelui (0/1), tumori ale timusului
(0/1), tumori tiroidiene (0/4), tumori mamare (0/2), tumori gastrice (0/2), tumori ale țesuturilor moi (0/2), tumori ale limbii (0/2), tumori
pulmonare (0/4), tumori metastatice de origine necunoscută (0/2), tumori hepatice (0/4), tumori renale (0/2), tumori ovariene (0/4), tumori
ale colului uterin (0/2), tumori testiculare (0/2), tumori ale colonului (0/2), tumori ale rectului (0/2) or tumori ale pielii (0/2). (Numărul total
al cazurilor tumorale evaluate = 209).
NCL-L-CD20-L26 este recomandat pentru utilizare ca parte a unui panel de anticorpi pentru a ajuta în caracterizarea tulburărilor
cu celule B.
Limitări generale
Imunohistochimia este un proces de diagnostic cu mai multe etape, care constă din instruirea specializată în ceea ce privește alegerea
reactivilor adecvați; alegerea, fixarea și procesarea țesutului; prepararea lamei IHC; și interpretarea rezultatelor de colorare.
Colorarea tisulară depinde de manipularea și procesarea țesutului înainte de colorare. Fixarea, congelarea, dezghețarea, spălarea,
uscarea, încălzirea, secționarea necorespunzătoare sau contaminarea cu alte țesuturi ori fluide pot cauza artefacte, captura anticorpilor
sau rezultate fals negative. Rezultatele inconsecvente pot fi atribuite diferențelor în ceea ce privește metodele de fixare și încorporare,
ori neregularităților inerente ale țesutului.
4
Contracolorația excesivă sau incompletă poate compromite interpretarea adecvată a rezultatelor.
Interpretarea clinică a oricărei colorări sau a absenței acesteia trebuie completată cu studii morfologice utilizând controale adecvate
și trebuie evaluată în contextul antecedentelor clinice ale pacientului, precum și al altor teste de diagnosticare efectuate de către un
patolog calificat.
CD20-L26-L-CE
Page 45