Leica Novocastra CD20 Mode D'emploi page 40

Всички спесимени преди и след фиксация, както и всички материали, изложени на тях, трябва да се третират като възможни
преносители на инфекция и да се изхвърлят, като се вземат правилни предпазни мерки. Никога не пипетирайте реагенти с уста
1
и избягвайте контакт на кожата и лигавиците с реагенти и спесимени. При контакт на реагенти или спесимени с чувствителни
зони измийте зоните с обилно количество вода. Потърсете медицинска помощ.
Свеждайте до минимум микробната контаминация на реагентите, в противен случай може да се появи увеличаване на
неспецифичното оцветяване.
Инкубационни времена или температури, различни от посочените, могат да доведат до грешни резултати. Всички подобни
промени трябва да бъдат валидирани от потребителя.
Качествен контрол
Различията в обработката на тъканите и техническите процедури в лабораторията на потребителя могат да доведат до
значително вариране на резултатите, налагащо редовно извършване на вътрешен контрол в допълнение към следните
процедури.
Контролите трябва да са свежи спесимени, взети по време на аутопсия/биопсия/операция, фиксирани във формалин,
обработени и вградени в парафинов восък, възможно най-бързо, по същия начин като проба(та) на пациента(ите).
Позитивна тъканна контрола
Използва се, за да се покажат правилно приготвени тъкани и правилни техники на оцветяване.
Една позитивна тъканна контрола трябва да бъде включена за всеки сет с тестови условия при всяка серия проби за
оцветяване.
Тъкан със слабо позитивно оцветяване е по-подходяща от тъкан със силно позитивно оцветяване за оптимален качествен
контрол и за откриване на по-малки нива на деградация на реагента.
2
Препоръчителната позитивна тъканна контрола е сливица.
Ако позитивната тъканна контрола не показва позитивно оцветяване, резултатите от спесимените, включени в теста, трябва да
се считат за невалидни.
Негативна тъканна контрола
Трябва да се изследва след позитивната тъканна контрола, за да се провери специфичността на белязването на таргетния
антиген от първичното антитяло.
Препоръчителната тъкан за негативна контрола е малкият мозък.
Алтернативно, разнообразието от различни видове клетки, присъстващи в повечето тъканни срези, често предлага места за
негативна контрола, но това трябва да се провери от потребителя.
Неспецифичното оцветяване, ако присъства, обикновено е дифузно на вид. Спорадично оцветяване на съединителна
тъкан може да се наблюдава и в части от прекомерно фиксирани във формалин тъкани. Използвайте интактни клетки за
интерпретация на резултатите от оцветяването. Некротичните или дегенериралите клетки често се оцветяват неспецифично.
3
Може да се видят неверни позитивни резултати поради неимунологично свързване на протеини или реакционни продукти
на субстрата. Те може да са причинени и от ендогенни ензими, като например псевдопероксидаза (еритроцити), ендогенна
пероксидаза (цитохром C) или ендогенен биотин (напр. черен дроб, гърда, мозък, бъбрек) в зависимост от типа на използваното
имунно оцветяване. За диференциране на ендогенна ензимна активност или неспецифично ензимно свързване от специфична
имунна реактивност ексклузивно може да се оцветят допълнителни тъкани от пациента, съответно със субстрат-хромоген
или с ензимни комплекси (авидин-биотин, стрептавидин, маркиран полимер) и субстрат-хромоген. Ако се появи специфично
оцветяване в негативната тъканна контрола, резултатите от спесимените на пациентите трябва да се считат за невалидни.
Негативна контрола на реагента
Използвайте неспецифична негативна контрола на реагента, вместо първичното антитяло, със срез от всеки спесимен на
пациента, за да се направи оценка на неспецифичното оцветяване и да се даде по-добра интерпретация на специфичното
оцветяване на мястото на антигена.
Тъкан от пациента
Изследвайте спесимените на пациенти, оцветени последно с NCL-L-CD20-L26. Наситеността на позитивното оцветяване
трябва да бъде оценена в контекста на всяко неспецифично фоново оцветяване на негативната контрола на реагента. Както
при всеки имунохистохимичен тест, един отрицателен резултат означава, че антигенът не е открит, а не че антигенът отсъства
в анализираните клетки/тъкан. Ако се налага, използвайте панел от антитела за идентифициране на фалшиво отрицателни
реакции.
Очаквани резултати
Нормални тъкани
Клонинг L26 открива антигена CD20 върху повърхността на клетките от B-клетъчната линия с изключение на плазмените клетки.
(Общ брой на оценените нормални случаи = 96).
Абнормни тъкани
Клонинг L26 оцветява 105/106 дифузни едроклетъчни B-клетъчни лимфома, 11/11 фоликуларни лимфома, 10/11 хронични
лимфоцитни лимфома, 2/11 болест на Ходжкин, 7/7 мантелоклетъчни лимфома, 1/1 B-клетъчен остър лимфобластен лимфом
и 1/1 лимфом на маргинална зона. С изключение на реактивни В клетки не се наблюдава оцветяване в анапластични
едроклетъчни лимфоми на T-клетките (0/7), ангиоимунобластни T-клетъчни лимфоми (0/4), T/NK-клетъчни лимфоми (0/3),
периферен Т-клетъчен лимфом (0/1), T-клетъчен лимфом (0/1), примитивен B/T-клетъчен остър лимфобластен лимфом (0/1),
мозъчни тумори (0/2), тумори на хранопровода (0/2), тумор на ларинкса (0/1), тумори на тимуса (0/1), тумори на щитовидната
жлеза (0/4), тумори на гърдата (0/2), тумори на стомаха (0/2), тумори на меките тъкани (0/2), тумори на езика (0/2), белодробни
тумори (0/4), метастатични тумори с неизвестен произход (0/2), тумори на черния дроб (0/4), бъбречни тумори (0/2), тумори на
яйчниците (0/4), тумори на цервикса (0/2), тумори на тестисите (0/2), тумори на ободното черво (0/2), тумори на правото черво
(0/2) и кожни тумори (0/2). (Общ брой на оценените случай на тумор = 209).
Продуктът NCL-L-CD20-L26 се препоръчва за употреба като част от панел от антитела, за да спомогне за
характеризирането на нарушения при B клетките.
CD20-L26-L-CE
Page 39