Qiagen Rotor-Gene Q MDx CE Manuel D'utilisation page 182

8. Définissez les conditions du cycle d'exécution de HRM. Modifiez les conditions par rapport à
l'amplicon. Pour la première série d'expériences, laissez un large domaine de fusion. Utilisez la
T théorique pour définir une plage adaptée. Une fois que vous avez déterminé où le produit va
m
fusionner, réduisez le domaine de fusion à 10 ºC maximum. Veillez à ce que le début de la fusion
survienne à 5 ºC avant la première transition de la fusion. La rampe par défaut est définie à 0,1 ºC
avec un maintien de 2 s à chaque palier. La transition de rampe minimale est de 0,05 ºC avec
un second maintien à chaque palier. Les données sont automatiquement acquises sur le canal de
HRM. L'optimisation du gain automatique est réalisée par défaut. Le logiciel recherche le
paramètre de gain optimal afin que la valeur de fluorescence maximale rapportée ne dépasse
pas 70 unités sur une échelle de 100. Notez que cette dernière ne peut dépasser 100.
9. Facultatif : définissez l'optimisation du gain automatique. Cela ne s'applique qu'au palier
d'amplification en temps réel et est défini pour le canal vert. Cliquez sur le bouton Optimize
Acquiring (Optimiser l'acquisition) (pour optimiser uniquement les canaux utilisés par un cycle
d'exécution). L'optimisation est optimale si elle est effectuée juste avant la première acquisition,
cochez pour cela la case Perform Optimization Before First Acquisition (Effectuer l'optimisation
avant la première acquisition). La plage de fluorescence de fond recommandée pour les
colorants intercalants est entre 1 et 3 unités de fluorescence. Pour changer ce paramètre, cliquez
sur le nom du canal à sélectionner dans la liste puis cliquez sur le bouton Edit (Modifier).
Manuel d'utilisation du Rotor Gene Q MDx CE 02/2022 182