Quantification Relative Delta Delta C - Qiagen Rotor-Gene Q MDx CE Manuel D'utilisation

6. Les valeurs Rel Min (Relative min.) et Rel Max (Relative max.) sont générées en calculant l'écart-
type du quotient à partir des écarts-types du gène d'intérêt et du gène de normalisation à l'aide
de la formule suivante :
où :
6.6.4

Quantification relative delta delta C

La méthode delta delta CT permet l'analyse d'expression génique relative. Elle est décrite par Livak
et Schmittgen (2001).*
Cette méthode ne nécessite pas d'inclure des courbes étalons à chaque cycle d'exécution. Chaque
échantillon est d'abord normalisé pour la quantité de matrice ajoutée par comparaison avec le
gène de normalisation. Ces valeurs normalisées sont ensuite normalisées par rapport à un traitement
avec calibrateur. Le calibrateur peut être, par exemple, des échantillons de type sauvage, un
contrôle non traité ou des échantillons au temps zéro.
Il est impératif que les efficacités de l'amplification du gène d'intérêt et du gène de normalisation
soient identiques et qu'elles soient validées conformément aux consignes de Livak et Schmittgen.
Il est impératif de définir correctement les noms des échantillons dans la fenêtre Edit Samples
(Modifier les échantillons), avec les mêmes échantillons marqués de façon identique dans chaque
analyse quantitative composite.
1. Analysez les données avec « Quantitation » (Quantification). Il n'est pas nécessaire d'exécuter
une courbe étalon une fois la validation effectuée.
Sous l'onglet Other (Autre) dans la fenêtre Analysis (Analyse), sélectionnez Delta Delta CT Relative
Quantitation (Quantification relative delta delta CT). Sélectionnez New Analysis (Nouvelle analyse).
* Livak, K.J. et Schmittgen, T.D. (2001) Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2^[–delta
delta C(T)] method. Methods 25, 402.
Manuel d'utilisation du Rotor Gene Q MDx CE 02/2022
cv cv 2 cv
= +
relconc GOI
s stddev
cv
= =
meanvalue
X
T
2
Norm
104