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Détermination du volume de retard
Le transfert d'une méthode LC avec gradient implique de calculer le volume
de retard pour les deux systèmes. Le volume de retard représente le volume
système entre le point de formation du gradient et l'entrée de la colonne. Il
varie d'un système à l'autre mais se situe généralement entre 0,1 et 5,0 mL.
Le volume de retard peut être mesuré en utilisant le milieu d'un gradient de
0 à 100 %. Pour cela, lancez un gradient entre deux solvants A et B identiques,
le solvant B étant différencié au moyen d'un marqueur. Effectuez la mesure
après avoir configuré le système sans la colonne pour la méthode à transférer.
Remplacez la colonne par un restricteur de faible volume, pour que la pompe
continuer de fonctionner normalement.
Consultez également :
transfert de méthode dans l'aide en ligne de la console ACQUITY.
Transfert de l'HPLC à l'UPLC
Respectez les recommandations suivantes pour conserver un profil
chromatographique d'un système à l'autre :
•
Prenez en compte la différence entre les volumes de retard des deux
systèmes. Le convertisseur détermine le nombre de volumes de colonne
du gradient à partir de cette différence, puis il conserve ce nombre lors
de chaque étape. Le convertisseur ajuste automatiquement la durée du
gradient en fonction de la différence de volume.
•
Le volume avant injection, spécifié dans la méthode d'instrument,
permet de faire démarrer le gradient avant le déclenchement de
l'injection. Utilisez un volume avant injection pour conserver constant le
rapport des volumes de retard des deux systèmes.
{[Volume de retard_Système 1(mL) -
Volume de retard_Système 2(mL)] ×
Volume_Colonne 2(mL)}/Volume_Colonne 1(mL)
•
Lorsque le volume du système cible est inférieur, prévoyez une période
de maintien isocratique pour prendre en compte la différence entre les
volumes de retard.
2-10
Optimisation des performances
la rubrique Mesure du volume système lors d'un
Volume avant injection =
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