Recommandations Générales - Waters ACQUITY UPLC H-Class Manuel

Recommandations générales
Les recommandations relatives au système ACQUITY UPLC H-Class sont
différentes de celles qui concernent les systèmes HPLC classiques,
principalement du fait des contraintes imposées au système par la
chromatographie sur petites particules, de taille inférieure à 2 μm. La
chromatographie UPLC est une séparation à échelle beaucoup plus petite et à
résolution plus élevée. La durée d'analyse est en outre plus courte en UPLC,
et les consommations de solvants et d'échantillons sont significativement
réduites.
Le chromatographe ACQUITY UPLC H-Class exige un fonctionnement
optimal du Gestionnaire d'échantillons. La dispersion d'échantillons est plus
critique sur les petites colonnes. La réduction de la durée d'analyse
chromatographique oblige également à une gestion efficace de la durée des
cycles.
Lors d'analyses UPLC rapides, il est possible que la largeur d'un des pics
observés soit inférieure à une demi-seconde. Waters recommande un taux
d'échantillonnage de 25 à 50 points sur la largeur du pic pour obtenir des
dosages et une représentation des pics corrects. Les taux d'échantillonnage
supérieurs à 20 points par seconde génèrent davantage de bruit sur la ligne de
base et nécessitent un ajustement en conséquence des constantes de temps de
filtrage. Le débit ACQUITY UPLC idéal diffère de celui d'une colonne HPLC
classique. Le tableau ci-dessous répertorie les recommandations relatives à
l'utilisation des colonnes ACQUITY UPLC pour les analyses isocratiques et
par gradient. Notez que les valeurs répertoriées sont données à titre indicatif
uniquement : la séparation optimale peut avoir lieu à une pression et/ou un
débit différents.
Débits idéaux pour la plage de masses moléculaires :
Taille de la colonne
2,1 × 50 mm
2,1 × 50 mm
2,1 × 50 mm
2,1 × 50 mm
2-2 Optimisation des performances
Masse moléculaire
<500
1000
1500
2000
Débit
600 μL/min
300 μL/min
150 μL/min
100 μL/min