Publicité
5
Optimisation du détecteur
Détermination des meilleures longueurs d'onde
Détermination des meilleures longueurs d'onde
Les longueurs d'onde d'excitation et d'émission représentent les paramètres
les plus importants à optimiser en détection de fluorescence. En général, il est
admis que la meilleure longueur d'onde d'excitation peut être déterminée à
partir du spectre d'excitation acquis à l'aide d'un spectrofluorimètre. Il est en
outre admis que la longueur d'onde d'excitation optimale déterminée pour un
type d'instrument particulier peut être utilisée pour d'autres instruments.
Ces deux postulats sont erronés.
La longueur d'onde d'excitation optimale dépend de l'absorption des compo-
sés mais également des caractéristiques de l'instrument (par exemple, du type
de lampe et des réseaux). Comme la plupart des molécules absorbent mieux
dans le domaine ultraviolet, le module a été conçu pour un rapport
signal/bruit optimal dans la plage 210 nm à 360 nm du spectre. Pour obtenir la
meilleure sensibilité, la longueur d'onde d'absorbance de votre molécule
d'échantillon doit concorder avec la plage de longueur d'onde pour laquelle
votre instrument est optimisé. En d'autres termes, une longueur d'onde d'exci-
tation dans le domaine ultraviolet. Votre module offre une plage étendue de
longueurs d'onde d'excitation. Cependant, pour obtenir une meilleure sensibi-
lité, vous devez sélectionner une longueur d'onde dans le domaine ultraviolet
(proche de 250 nm).
Les éléments qui limitent l'efficacité dans la région basse de l'ultraviolet sont
la lampe-éclair au xénon et les réseaux. Les lampes de type éclair décalent la
longueur d'onde optimale et abaissent les plages de longueurs d'onde du
module avec un maximum de 250 nm. Le réseau d'excitation est de type éche-
lette pour une efficacité maximale à 300 nm.
120
Manuel d'utilisation du FLD Agilent 1260
Publicité
Chapitres
