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Utilisation du détecteur à fluorescence
Développement de méthodes
que composé. Cette procédure étant fastidieuse, elle n'est appliquée que lors-
que le nombre de composés d'intérêt est limité.
Le système CPL Agilent Infinity série 1200 offre trois moyens différents
d'obtenir des informations complètes sur la fluorescence d'un composé :
Procédure I - Effectuer un balayage fluorimétrique hors ligne pour un compo-
sé unique comme indiqué ci-dessus pour la phase mobile. Pour cela, on utilise
de préférence une cuvette à FLD manuelle lorsque des composés purs sont dis-
ponibles.
Procédure II - Effectuer deux analyses par CPL avec le détecteur à fluores-
cence Agilent Infinity 1260 pour séparer le mélange de composés dans des
conditions connues et acquérir séparément les spectres d'émission et d'excita-
tion.
Procédure III - Utiliser un couplage FLD /DAD Agilent Infinity série 1200 et
acquérir les spectres UV-Visible (équivalents aux spectres d'excitation) avec le
DAD et des spectres d'émission avec le FLD, le tout en une seule analyse.
Procédure I - Balayage fluorimétrique
Par le passé, l'acquisition des spectres de fluorescence avec les précédentes
générations de détecteurs à fluorescence pour CPL était relativement com-
plexe. Les spectrophotomètres à fluorescence standard servaient donc à
acquérir des informations spectrales sur des composés inconnus. Malheureu-
sement, cette approche limite les possibilités d'optimisation du fait des diffé-
rences de conception optique qui existent entre un détecteur pour CPL et un
spectrophotomètre à fluorescence dédié, ou même entre deux détecteurs. Ces
différences peuvent causer des variations des longueurs d'onde d'excitation et
d'émission optimales obtenues.
Le détecteur à fluorescence Agilent Infinity 1260 permet d'effectuer un
balayage fluorimétrique qui fournit toutes les informations spectrales jusque
là obtenues à l'aide d'un spectrophotomètre à fluorescence standard indépen-
dant du détecteur à fluorescence pour CPL.
l'ensemble des informations concernant la quinidine obtenues à l'aide du
détecteur à fluorescence Agilent Infinity 1260 et d'une cuvette manuelle en
une seule mesure hors ligne. Les longueurs d'onde d'excitation et d'émission
optimales correspondent aux coordonnées des maxima du tracé tridimension-
nel. L'un des trois maxima au centre du tracé peut être utilisé pour définir la
longueur d'onde d'excitation. Le choix dépend des composés supplémentaires
à analyser par chromatographie et du bruit de fond, qui peut varier en fonc-
82
Figure
31, page 84 présente
Manuel d'utilisation du FLD Agilent 1260
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