Publicité
Opération 2 : Optimisation des limites de détection et de la
sélectivité
Pour obtenir les limites de détection et la sélectivité optimales, les analystes
doivent déterminer les propriétés fluorescentes des composés d'intérêt. Pour
obtenir des limites de détection et une sélectivité optimales, les longueurs
d'onde d'excitation et d'émission peuvent être sélectionnées. En général, les
spectres de fluorescence obtenus avec des instruments différents présentent
des différences considérables liées au matériel et aux logiciels utilisés.
L'approche classique consiste à extraire une longueur d'onde d'excitation
appropriée à partir du spectre UV, qui est similaire au spectre d'excitation de
fluorescence (voir
Ensuite, lorsque la longueur d'onde d'émission optimale est déterminée, le
spectre d'excitation est acquis.
Spectre d'excitation
avec une émission à
440 nm, spectre
d'émission avec une
excitation à 250 nm
pour la quinidine à
1 µg/ml.
Paramètres de
détection :
Pas de 5 nm, PMT de
12, temps de réponse
de 4 s.
Figure 30
Vous devez répéter cette opération pour chaque composé à l'aide d'un spectro-
photomètre à fluorescence ou sur un système CPL sans circulation. Chaque
composé doit normalement être analysé séparément. Ainsi, un ensemble de
spectres d'excitation et d'émission est obtenu
Manuel d'utilisation du FLD Agilent 1260
Figure
30, page 81), puis à enregistrer le spectre d'émission.
Spectres d'excitation et d'émission de la quinidine
Utilisation du détecteur à fluorescence
Développement de méthodes
(Figure
29, page 79) pour cha-
4
81
Publicité
Chapitres
