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Utilisation du détecteur à fluorescence
Développement de méthodes
Opération 3 : Paramétrage des méthodes de routine
Dans les analyses de routine, la matrice des échantillons peut avoir une
influence considérable sur les temps de rétention. Pour obtenir des résultats
fiables, la préparation de l'échantillon doit être rigoureuse afin d'éviter les
interférences ou la méthode CPL utilisée doit être suffisamment robuste. Avec
les matrices complexes, la détection multi-canal simultanée est plus fiable que
la commutation de longueur d'onde chronoprogrammée. En outre, le FLD peut
acquérir des spectres de fluorescence tout en enregistrant les signaux du dét-
ecteur pour l'analyse quantitative. On dispose ainsi de données qualitatives
pour la confirmation des pics et les vérifications de pureté de routine.
Détection multi-canal
La commutation de longueur d'onde chronoprogrammée est généralement uti-
lisée pour obtenir des limites de détection basses et une sélectivité élevée pour
les analyses quantitatives de routine. Cette commutation est difficile à réaliser
si l'élution de certains composés est rapprochée et s'il est nécessaire de chan-
ger la longueur d'onde d'excitation ou d'émission. Les pics peuvent être défor-
més et la quantification peut être impossible si la commutation de longueur
d'onde intervient lors de l'élution d'un composé. Cela se produit très souvent
avec les matrices complexes qui influencent la rétention des composés.
En mode spectral, le FLD peut acquérir simultanément jusqu'à quatre signaux
différents. Ces signaux peuvent tous être utilisés pour l'analyse quantitative.
En dehors des matrices complexes, ceci s'avère avantageux lorsque l'on
recherche des impuretés à des longueurs d'onde supplémentaires. Ceci pré-
sente également l'avantage d'abaisser les limites de détection ou d'accroître la
sélectivité du fait de l'optimisation continuelle des longueurs d'onde. Le nom-
bre de points de données acquis par signal est réduit et les limites de détection
peuvent donc être plus élevées qu'en mode mono-canal, suivant les paramè-
tres du détecteur.
Une analyse de PNA peut être effectuée, par exemple, en utilisant la détection
multi-canal simultanée au lieu de la commutation de longueur d'onde. Avec
quatre longueurs d'onde d'émission différentes, les 15 PNA peuvent être
détectés
92
(Tableau
, page 94).
Manuel d'utilisation du FLD Agilent 1260
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