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La température peut être ajustée pendant le processus d'optimisation de la méthode.
Si vous craignez d'avoir un composé thermiquement instable ou semi volatil, préférez une
température inférieure pour améliorer la sensibilité en réduisant la décomposition thermique ou
l'évaporation. Néanmoins, pour un débit et solvant donné, il y a un point à partir duquel le bruit du
chromatogramme augmente énormément car la phase mobile n'est pas évaporée dans sa totalité.
Considérez par exemple l'analyse de la caféine avec des températures d'évaporation de 30 °C
et 60 °C (figure 6.1) [Les conditions posées au fractionnement sont - colonne : ODS KromasilTM
(5 µm, 30× 2.1 mm), échantillon : 4 µL (10 mg/L) caféine]. Eluant : Eau, 0.2 mL/min, température
comme indiqué). Il est évident que l'utilisation d'une basse température améliore nettement les
résultats des composés volatils et à haute sensibilité thermique.
Fig. 6.26: Chromatogramme de la caféine à différentes températures
La température minimum pouvant être utilisée est fonction du débit et de la nature de la
phase mobile.
6.4.2
Optimisation de la phase mobile
Toute particule contenue dans la phase mobile contribue à augmenter le bruit de fond.
La pureté du solvant est un facteur décisif du bruit de fond. Lors du filtrage du solvant, vérifiez qu'il
n'extrait pas d'agent contaminant du filtre.
La pureté du solvant est critique pour les bruits de fond peu élevés. La sensibilité est
proportionnellement inverse au bruit du solvant.
Dans la plupart des cas, l'eau distillée et les solvants spécifiés pour les applications HPLC
délivrent de bons résultats. La comparaison de différents solvants fait apparaître que le paramètre
le plus critique est le Résidu après évaporation; ce paramètre devrait être inférieur à 1 ppm afin
d'augmenter la sensibilité du détecteur au maximum.
Prenez par exemple l'analyse d'un échantillon dans une phase mobile, de l'eau pure, et dans une
autre phase mobile constituée d'eau polluée. Il est évident que l'utilisation d'un solvant de qualité
insuffisante peut diminuer nettement votre rapport signal/bruit (sensibilité).
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6 Fonctionnement
Manuel d'instructions, version B
C-650
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