Agilent Technologies 1290 Infinity Manuel D'utilisation page 78

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Comment optimiser la performance de votre module
Comment obtenir la résolution la plus élevée
L'équation de résolution montre que le prochain terme le plus important est le
nombre de plaques ou l'efficacité, N, et ceci peut être optimisé de nombreuses
manières. N est inversement propotionnel à la taille de particule et directe-
ment proportionnel à la longueur d'une colonne ; ainsi, une taille de particule
plus petite et une colonne plus longue donneront un numéro de plaque plus
élevé. La pression augmente à l'inverse du carré de la taille de particule et pro-
portionnellement à la longueur de la colonne. C'est pourquoi le système 1290
Infinity LC a été conçu pour atteindre 1200 bar afin de pouvoir traiter des par-
ticules de moins de deux microns et d'augmenter la longueur de colonne à
100 mm ou 150 mm. Il existe même des exemples de colonnes de 100 mm et
150 mm raccordées pour obtenir une longueur de 250 mm. La résolution aug-
mente avec la racine carrée de N, ainsi le fait de doubler la longueur de la
colonne augmente la résolution d'un facteur de 1.4. Ce qui est possible dépend
de la viscosité de la phase mobile, car celle-ci est liée directement à la pres-
sion. Les mélanges de méthanol génèrent plus de contrepression que les
mélanges d'acétonitrile. L'acétonitrile est souvent préféré car les formes de pic
sont meilleures et plus étroites en plus de la viscosité plus faible, mais le
méthanol donne généralement une meilleure sélectivité (certainement pour
les petites molécules de moins de 500 Da environ). La viscosité peut être
réduite en augmentant la température, mais il ne faut pas oublier que ceci
peut modifier la sélectivité de la séparation. Des expériences montreront si
ceci augmente ou diminue la sélectivité. Lorsque le flux et la pression augmen-
tent, il faut noter que le chauffage par friction à l'intérieur de la colonne aug-
mente et peut entraîner une dispersion légèrement plus élevée et
éventuellement un léger changement de sélectivité, qui peuvent tous deux être
considérés comme une diminution de la résolution. Ce dernier cas peut être
retardé en réduisant la température du thermostat de quelques degrés et
encore une fois, des expériences donneront la réponse.
La courbe van Deemter montre que le débit optimal à travers une colonne STM
est supérieur aux particules plus grandes et assez plate quand le débit aug-
mente. Généralement, près de la valeur optimale, les débits des colonnes STM
sont : 2 ml/min pour un diamètre intérieur de 4,6 mm et 0,4 ml/min pour un
diamètre intérieur de 2,1 mm.
78 Manuel d'utilisation de la pompe quaternaire 1290 Infinity