Table des Matières
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Programmes PCR
Pour créer un programme PCR en utilisant L'assistant PCR
2 Informations sur L'amorceur
3 Longueur du Produit
4 Informations sur la Source DNA
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• Les deux méthodes ci-dessous permettent de saisir les informations sur
l'amorceur. Cliquez sur Suivant à l'issue de la procédure.
•
Saisissez les séquences de votre amorceur ou recherchez votre
séquence sur un lecteur USB connecté. Nous vous conseillons d'utiliser
le lecteur USB fourni avec votre cycleur.
•
En l'absence d'informations sur la séquence, saisissez les
températures de fusion (Tm) de vos amorceurs.
Les informations sur l'amorceur sont utilisées pour déterminer la
température de recuit du programme PCR. La température de recuit est
définie à 5°C en dessous du Tm moyen des deux amorceurs. Si vous avez
saisi les séquences de base des amorceurs, plutôt que les Tm, le logiciel
calcule le Tm de chaque amorceur selon la formule :
Tm = 69,3 + (0,41 x GC%) – (650/N)
où GC% est le pourcentage de contenu GC dans la séquence de l'amorceur
et où N est le nombre de nucléotides dans la séquence de l'amorceur.
• Saisissez la longueur prévue du produit et sélectionnez bp ou kb pour les
unités. Cliquez sur Suivant à l'issue de la procédure.
L'assistant utilise la longueur du produit pour définir le temps
d'élongation du programme PCR.
• Indiquez la source du DNA modèle dans la liste, puis appuyez sur
Suivant. Les options de la source sont les suivantes :
•
cDNA
•
DNA génomique
•
DNA vectoriel
Les informations de la source de DNA permettent de déterminer la durée
du démarrage à chaud ou de l'étape initiale de dénaturation et de l'étape
d'élongation.
Agilent SureCycler 8800 - Guide de configuration et d'utilisation
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