Agilent Technologies Infinity 1290 Manuel D'utilisation page 70

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Comment optimiser la performance de votre module
Comment obtenir la résolution la plus élevée
L'équation de résolution montre que le prochain terme le plus important est le
nombre de plaques ou l'efficacité, N, et ceci peut être optimisé de nombreuses
manières. N est inversement proportionnel à la taille de particule et directe-
ment proportionnel à la longueur d'une colonne ; ainsi, une taille de particule
plus petite et une colonne plus longue donneront un numéro de plaque plus
élevé. La pression augmente à l'inverse du carré de la taille de particule et pro-
portionnellement à la longueur de la colonne. C'est pourquoi le système CPL
Infinity 1290 a été conçu pour atteindre des pressions plus élevées afin de
pouvoir traiter des particules de moins de deux microns et d'augmenter la lon-
gueur de colonne à 100 mm ou 150 mm. Il existe même des exemples de colon-
nes de 100 mm et 150 mm raccordées pour obtenir une longueur de 250 mm.
La résolution augmente avec la racine carrée de N, ainsi le fait de doubler la
longueur de la colonne augmente la résolution d'un facteur de 1,4. Ce qui est
possible dépend de la viscosité de la phase mobile, car celle-ci est liée directe-
ment à la pression. Les mélanges de méthanol génèrent plus de contrepression
que les mélanges d'acétonitrile. L'acétonitrile est souvent préféré car les for-
mes de pic sont meilleures et plus étroites en plus de la viscosité plus faible,
mais le méthanol donne généralement une meilleure sélectivité (certainement
pour les petites molécules de moins de 500 Da environ). La viscosité peut être
réduite en augmentant la température, mais il ne faut pas oublier que ceci
peut modifier la sélectivité de la séparation. Des expériences montreront si
ceci augmente ou diminue la sélectivité. Lorsque le flux et la pression augmen-
tent, il faut noter que le chauffage par friction à l'intérieur de la colonne aug-
mente et peut entraîner une dispersion légèrement plus élevée et
éventuellement un léger changement de sélectivité, qui peuvent tous deux être
considérés comme une diminution de la résolution. Ce dernier cas peut être
retardé en réduisant la température du thermostat de quelques degrés et
encore une fois, des expériences donneront la réponse.
La courbe van Deemter montre que le débit optimal à travers une colonne STM
est supérieur aux particules plus grandes et assez plate quand le débit aug-
mente. Généralement, près de la valeur optimale, les débits des colonnes STM
sont : 2 ml/min pour un diamètre intérieur de 4,6 mm et 0,4 ml/min pour un
diamètre intérieur de 2,1 mm.
Dans les séparations isocratiques, l'augmentation du facteur de rétention k
donne une meilleure résolution car le soluté est conservé plus longtemps.
Dans les séparations du gradient, la rétention est décrite par k
tion suivante :
70 Manuel d'utilisation de la pompe binaire Agilent Infinity 1290
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dans l'équa-