Buchi B-395 Pro Manuel D'utilisation page 64

Procédure
1. Préparer le réacteur et l'autoclaver en suivant les instructions consignées dans les sections 6.10
et 6.11.
2. Préparer toutes les solutions et le matériel de laboratoire.
3. Remplir le réacteur autoclavé de 225 mL de solution de polymérisation.
4. Une culture d'environ 6×10
resuspension du culot dans un tampon de lavage MOPS stérile de 2 mL mélangé à 10 mL de
solution d'alginate de sodium à 1,5 %. Attention de ne pas introduire ou très peu de bulles d'air
pendant le mélange.
5. Remplir une seringue de 20 mL de suspension cellules-alginate et fixer la seringue au réacteur
dans une hotte à air laminaire.
6. Fixer le réacteur à l'unité de commande de l'Encapsulator placée sur la paillasse.
7. Lancer la formation de billes avec les paramètres établis précédemment.
8. Laisser durcir les billes pendant 5 minutes, puis arrêter l'agitateur et vidanger la solution de poly-
mérisation.
NOTE
Les billes et plus tard les capsules doivent toujours être recouvertes d'une petite quantité de liquide
pour prévenir leur agglutination. Sinon la resuspension des billes et des capsules est difficile et la
membrane peut être endommagée.
9. Pomper 75 mL de solution PLL à 0,05 % et laisser se former la membrane PLL-alginate pendant
10 minutes.
10. Drainer la solution PLL à 0,05 %.
11. Pomper 150 mL de tampon de lavage MOPS, agiter pendant 1 min et drainer.
12. Pomper à nouveau 150 mL de tampon de lavage MOPS, agiter pendant 5 min et drainer.
13. Pomper 100 mL de solution d'alginate à 0,03 % et agiter pendant 5 minutes pour permettre la
formation de la membrane extérieure d'alginate, puis drainer la solution d'alginate.
14. Pomper 150 mL de tampon de lavage MOPS, agiter pendant 1 min et drainer le tampon.
15. Pomper 150 mL de solution de dépolymérisation et agiter pendant environ 10 minutes pour
dissoudre l'alginate du noyau des billes. Le temps de dissolution dépend du poids moléculaire
et de la pureté de l'alginate, ainsi que de la susceptibilité du produit à encapsuler à la solution de
dépolymérisation.
16. Vidanger la solution de dépolymérisation.
17. Pomper 150 mL de tampon de lavage, resuspendre les capsules et les transférer dans le flacon
collecteur.
18. Transférer les capsules dans le milieu de culture.
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cellules (ou conforme aux besoins personnels) est centrifugée avec
6
6 Fonctionnement
B-395 Pro Manuel d'utilisation, Version E