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Optimisation du système CPL Agilent 1290 Infinity
Comment améliorer la sensibilité
bande passante naturelle à mi-hauteur de la bande d'absorption dans le spec-
tre UV. Dans l'exemple de l'acide anisique, le rapport est égal à 30 nm.
La longueur d'ondes analytique est habituellement réglée à un maximum de
longueur d'ondes afin d'augmenter la sensibilité de cette molécule. Le détec-
teur est linéaire jusqu'à 2 AU et au-delà pour de nombreuses applications.
Ceci offre une vaste gamme linéaire pour la concentration. Pour des analyses
de haute concentration, la gamme linéaire de concentration peut être étendue
en réglant la longueur d'ondes sur un avec une plus faible absorbance telle
qu'un minimum de longueur d'ondes, ou en choisissant une bande passante
plus large qui comporte généralement des valeurs d'absorbance plus faibles.
L'utilisation d'un maximum et d'un minimum de longueur d'ondes pour quan-
tification remonte à l'époque des détecteurs UV traditionnels qui, à cause des
tolérances mécaniques pour le déplacement des réseaux, devaient éviter les
parties en pente raide du spectre. Les détecteurs basés sur la technologie de la
barrette de diodes ne souffrent pas de cette limitation, mais, pour des raisons
de convention, le maximum et le minimum sont choisis de préférence à
d'autres parties du spectre.
La bande passante de référence est normalement paramétrée sur une région
du spectre UV dans laquelle l'analyte n'a pas d'absorbance. Ceci est illustré
pour le spectre de l'acide anisique dans la
Figure
23, page 66. Ce spectre est
typique pour de nombreuses petites molécules comportant un chromophore
UV. Pour obtenir de meilleurs résultats, la référence a été paramétrée afin que
ce soit une bande large aussi proche de la longueur d'ondes du signal que pos-
sible, mais sur une région d'absorbance zéro. Des bandes passantes de référen-
ce de 60 nm à 100 nm sont couramment utilisées. La référence par défaut est
360 nm avec une bande passante de 100 nm. On utilise une large bande pas-
sante parce que cela réduit le bruit dans le signal de référence (depuis la théo-
rie statistique, l'erreur, c.-à-d. que le bruit, dans ce cas, est réduit par la racine
carrée du nombre de déterminations). Il est important que la bande passante
de référence ne s'étende pas jusqu'à une partie du spectre ayant quelque
absorbance, car cela réduirait alors le signal résultant et la sensibilité serait
également réduite. L'utilisation d'une longueur d'ondes de référence peut
aider à réduire la dérive ou les variations dans le chromatogramme induites
par les changements de l'indice de réfraction dus aux fluctuations de la tempé-
rature ambiante ou à l'opération du gradient. On peut facilement tester l'effet
d'un signal de référence en paramétrant deux signaux autrement identiques,
l'un avec un signal de référence, et l'autre sans signal de référence. Si aucune
partie du spectre ne présente une absorbance zéro, il sera alors préférable de
désactiver le signal de référence.
Système CLP Agilent 1290 Infinity - Manuel du système et guide de référence rapide
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