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Comment augmenter le volume d'injection
La configuration standard de l'échantillonneur automatique Agilent 1290 Infi-
nity inclut une boucle d'échantillonnage à volume variable pour un maximum
de 20 µl injections. Le doseur peut injecter un volume maximal de 40 µl et
vous pouvez changer la cartouche de la boucle d'échantillonnage dans ce but
(consultez le Guide de l'échantillonneur automatique 1290 Infinity pour des
informations plus détaillées). Le volume mort du système dû à l'échantillon-
neur automatique augmente en conséquence.
Lorsqu'une méthode est réduite pour une plus petite colonne, il importe que la
conversion de la méthode tienne compte de la réduction du volume d'injection
proportionnellement au volume de la colonne pour conserver le niveau de per-
formance de la méthode. Ceci permet de maintenir un pourcentage identique
du volume d'injection par rapport à la colonne. Cet aspect est d'autant plus
important que le solvant d'injection est plus fort (plus éluotropique) que le
début de la phase mobile ; toute augmentation affecte la séparation, en parti-
culier pour les pics précoces de l'analyse (faible facteur de rétention). Dans
certains cas, il est à l'origine de la distorsion des pics. C'est pourquoi la règle
générale consiste à maintenir un solvant d'injection similaire ou plus faible
que la composition d'origine du gradient. Cela influe sur la possibilité et le
niveau d'augmentation du volume d'injection. Vous devez surveiller les signes
d'augmentation de la dispersion (pics plus larges ou plus inclinés et de résolu-
tion réduite) lorsque vous tentez d'augmenter le volume d'injection.
Lorsqu'une injection est effectuée dans un solvant faible, le volume peut pro-
bablement être augmenté davantage, car l'effet obtenu tend à concentrer l'ana-
lyte en haut de la colonne, au début du gradient. Inversement, si l'injection est
effectuée dans un solvant plus fort que la phase mobile de départ, le volume
d'injection augmenté répartit la bande d'analyte vers le bas de la colonne,
avant le gradient, produisant une dispersion des pics et une perte de résolu-
tion.
Le point principal pour déterminer le volume d'injection est probablement le
diamètre de la colonne, qui exerce un impact important sur la dispersion des
pics. Les hauteurs de pics peuvent être plus élevées dans une colonne étroite
qu'avec une injection plus importante dans une colonne plus large, car la dis-
persion des pics est moindre. Avec un diamètre intérieur de 2,1 mm , les volu-
mes d'injection des colonnes varient généralement entre 5 et10 µl , bien que
cette valeur dépende largement de la chimie de l'analyte et de la phase mobile,
Système CLP Agilent 1290 Infinity - Manuel du système et guide de référence rapide
Optimisation du système CPL Agilent 1290 Infinity
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