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Optimisation du système CPL Agilent 1290 Infinity
Comment améliorer la sensibilité
Un chromatogramme ou un signal UV est un tracé de données d'absorbance en
fonction de la durée, et il est défini par sa longueur d'ondes et sa bande pas-
sante.
• La longueur d'ondes indique le centre de la bande de détection.
• La bande passante définit la gamme de la longueur d'ondes sur laquelle est
Par exemple, un signal d'une longueur d'onde de 250 nm avec une bande pas-
sante de 16 nm sera une moyenne des données d'absorbance de 242 nm à
258 nm. Il est de plus possible de définir une longueur d'ondes de référence et
une bande passante de référence pour chaque signal. L'absorbance moyenne
calculée depuis la bande passante de référence centrée sur la longueur
d'ondes de référence sera soustraite de sa valeur équivalente à la longueur
d'ondes du signal pour produire le chromatogramme de sortie.
On peut choisir la longueur d'ondes et la bande passante du signal afin de pou-
voir les optimiser pour :
• détection universelle de bande large ;
• détection sélective de bande étroite ;
• sensibilité pour une analyte particulière.
La bande large ou la détection universelle travaillent avec une large bande pas-
sante permettant de détecter toute espèce ayant une absorbance dans cette
gamme. Par exemple, pour détecter toutes les molécules absorbantes entre
200 nm et 300 nm, paramétrez un signal à 250 nm avec une bande passante de
100 nm. L'inconvénient de cette méthode est que la sensibilité ne sera pas
optimale pour une quelconque de ces molécules. On utilise plus souvent une
bande étroite ou une détection sélective. Le spectre UV pour une molécule par-
ticulière est analysé, et un maximum d'absorbance approprié est sélectionné.
Si possible, évitez la gamme dans laquelle les solvants absorbent fortement
(inférieure à 220 nm pour le méthanol, inférieure à 210 nm pour l'acétonitri-
le). Par exemple, dans la
mum d'absorbance convenable à 252 nm. Une bande passante étroite de 4 nm
à 12 nm donne généralement une bonne sensibilité, elle est spécifique à
l'absorbance dans une gamme étroite.
On peut optimiser la bande étroite pour la sensibilité d'une molécule particu-
lière. Étant donné que la bande passante est augmentée, le signal est réduit,
mais il en est de même pour le bruit et il y aura un rapport signal/bruit opti-
mal. Comme guide approximatif, ce rapport optimal est souvent proche de la
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calculée la valeur moyenne de l'absorbance pour donner un résultat à cha-
que point temporel.
Système CLP Agilent 1290 Infinity - Manuel du système et guide de référence rapide
Figure
23, page 66, l'acide anisique affiche un maxi-
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