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Optimisation du système CPL Agilent 1290 Infinity
Comment améliorer la résolution
Dans les séparations isocratiques, l'augmentation du facteur de rétention k,
entraîne une augmentation de la résolution car les solutés sont retenus plus
longtemps. Dans les séparations en gradient, k
l'équation suivante :
avec :
• k
• t
• F = débit (ml/min) ;
• V
• %B = modification de la fraction du solvant B en cours de gradient ;
• S = constante (env. 4 à 5 pour les petites molécules).
Cette équation indique que k et par conséquent la résolution peuvent être aug-
mentés en utilisant un gradient à plus faible pente (en général, une pente de 2
à 5 %/min convient), un débit plus élevé et un faible volume de colonne. Cette
équation montre également comment accélérer un gradient existant : si le
débit est doublé, mais que la durée du gradient est divisée par deux, k
constant et la séparation similaire, mais deux fois plus rapide. Les dernières
recherches publiées montrent que pour une température supérieure à 40 °C,
une colonne STM courte fait preuve d'une capacité de pics supérieure à une
colonne STM longue parce qu'elle opère plus rapidement. (Cf. Petersson et al.,
J.Sep.Sci, 31, 2346-2357, 2008, Maximizing peak capacity and separation
speed in liquid chromatography [Optimisation de la capacité de pics et de la
vitesse de séparation en chromatographie liquide]).
Toute réduction du volume hors colonne réduit la dispersion et améliore la
résolution. Ce paramètre est déjà optimisé dans les systèmes de LC 1290 Infi-
nity avec capillaires de faible diamètre (narrow bore0,12 mm ). et la cellule à
cartouche Max-light (s'assurer que la longueur la plus faible possible est utili-
sée entre la colonne et le détecteur).
Enfin, toute amélioration de la résolution sera préservée si l'acquisition des
données est suffisamment rapide pour échantillonner finement les pics les
plus étroits.
60
*
= valeur moyenne de k ;
durée du gradient (ou du segment de gradient), en min ;
G
= volume mort de la colonne ;
m
Système CLP Agilent 1290 Infinity - Manuel du système et guide de référence rapide
*
représente la rétension dans
*
reste
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