Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 52

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Perguntas frequentes
Sinais fracos ou inexistentes
• Hibridize novamente e certifique-se de que a sonda tenha sido
misturada corretamente e de que esteja em TA antes do uso.
• Hibridize novamente e certifique-se de que a lavagem de estrin-
gência (tampão de lavagem I)esteja na temperatura correta
(72 °C (±1 °C)).
• Considere a queda de temperatura ao adicionar lâminas
a reagentes preaquecidos.
• Use no mínimo 10 μl de sonda por 22 x 22 mm de lamínula.
• Verifique se os filtros do microscópio e a fonte luminosa estão
corretos e em pleno funcionamento.
Muito background em uma hibridização cruzada específica ao usar
sondas centroméricas ou subteloméricas.
• Aumente a temperatura da lavagem de estringência
(tampão de lavagem I) quando lavar as lâminas.
Aplicação mínima de sondas:
Tamanho da lamínu-
la de vidro
22 x 22 mm
22 x 32 mm
22 x 50 mm
Recomendações para o procedimento:
A concentração da temperatura e do tampão (estringência) de hibri-
dização e de lavagem são importantes, uma vez que uma estringên-
cia mais baixa pode resultar de ligação não específica da sonda a
outras sequências, e uma estringência mais elevada pode resultar
em falta de sinal. A desnaturação incompleta do DNA alvo e/ou do
DNA da sonda pode resultar em falta de sinal.
Aplicação mínima de sondas
10 μl
15 μl
23 μl
Kreatech FISH probes