Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 32

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Préparation de la sonde :
Avant utilisation, centrifuger rapidement le tube contenant la sonde,
puis passer le brièvement au Vortex et centrifuger de nouveau rapi-
dement le tube. Laissez la sonde parvenir à TA avant utilisation.
Les sondes Kreatech FISH sont réservées à la recherche uniquement
(RUO) et sont fournies prêtes à l'utilisation (RtU).
Les sondes centromériques, subtélomériques et chromosome
complet sont fournies en formats concentrés 5 x ; elles doivent être
diluées à l'aide du tampon d'hybridation fourni et/ou avec d'autres
sondes concentrées. Pour connaître les caractéristiques de dilution,
consultez l'étiquette du flacon et la notice figurant sur l'emballage de
la sonde concernée.
Co-dénaturation :
1. Appliquez 10 μl de sonde ou de mélange-sonde par surface de
22 x 22 mm.
2. Recouvrez d'une lamelle en verre puis scellez au Fixogum
(Réf LK-071A) ou à la colle au caoutchouc.
3. Dénaturez l'échantillon et la sonde sur un ThermoBrite
(Réf. TS-01/02), pendant 5 min, à 75 °C.
Hybridation :
Faites incuber toute la nuit à 37 °C dans un ThermoBrite
(Réf. TS-01/02) ou dans une chambre humide.
Lavage post-hybridation :
1. Préchauffez le tampon de lavage Wash Buffer I (0,4 x SSC /
Igepal 0,3 %) (Réf. LK-102A) à 72 °C.
2. Retirez la colle au caoutchouc.
3. Placez 14 lames maximum dans 200 ml de tampon de lavage Wash
Buffer II (2 x SSC / Igepal 0,1 %) (Réf. LK-103A), puis faites incuber
Kreatech FISH probes