Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 48

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Os seguintes protocolos também podem ser usados como alternativa:
Pré-tratamento:
Protocolo I (protocolo padrão, se não for satisfatório use o protocolo II)
1. Para preparar as lâminas, programe as lâminas para 10 minutos (min)
em 80 °C, e deixe as lâminas esfriarem a temperatura local (TA).
2. Coloque as lâminas em ácido acético fresco, preparado de 70%
(em H O(dH
2
3. Coloque as lâminas em 1 x PBS, pH 7,4, incube por 30 segundos em TA.
4. Coloque as lâminas em 1 x PBS, pH 7,4, incube por 5 min em TA.
5. Desidrate a lâmina em álcool de 70%, 85% e 100%, incube cada
uma por 1 min em TA. Secagem em TA.
Prosseguir com a preparação de
Protocolo II (para lâminas com background citoplasmático ou
preparações diretas (fluido amniótico ou vilosidades crônicas)
1. Preaqueça 2 x SSC, pH 7,0 e 0,01 M de HCl em 37 °C
2. Coloque lâminas de amostras secas em 2 x SSC preaquecido,
pH 7,0, incube em 37 °C por 2 min.
3. Adicione a pepsina a 0,01 M de HCl preaquecido para obter uma
concentração final de 0,005%.
4. Coloque as lâminas em 0,005% de uma solução de pepsina em
0,01 M de HCl e incube em 37 °C por 5 - 15 min (dependendo da
quantidade de base citoplasmática).
5. Coloque as lâminas em 1 x PBS, pH 7,4, incube por 3 min em TA.
6. Repare as lâminas posteriormente incubando-as em 1% de formal-
deído tamponado em 1 x PBS / 20 mM MgCl
7. Coloque as lâminas em 1 x PBS, pH 7,4, incube por 3 min em TA.
8. Desidrate a lâmina em álcool de 70%, 85% e 100%, incube cada
uma por 1 min em TA. Secagem em TA.
Prosseguir com a preparação de sondas.
O deionizado)), incube por 1 min em TA.
2
sondas.
2
Kreatech FISH probes
por 10 min em TA.