Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 51

Kreatech FISH probes
Fluoróforos
PlatinumBright™ 415
PlatinumBright™ 495
PlatinumBright™ 550
Troubleshooting
Protocolo alternativo para espécimes da citologia:
1. Preaqueça 50 ml de 2 x SSC / 0,5% Igepal (LK-105B) em um frasco
de coplim a 37 °C com lavagem em água. Coloque as lâminas
preparadas no frasco de coplim e incube por 15 minutos.
2. Desidrate as lâminas em álcool de 70%, 85% e 100%, incube cada
uma por 1 min em TA. Ar seco em TA.
Prosseguir com a preparação de sondas.
Protocolo alternativo para desnaturação de sonda (sonda separada
e amostra de desnaturação):
1. Preaqueça formamida de 70% / 2 x SSC, pH 7,0 a 72 °C.
2. Desnature as lâminas em formamida de 70% / 2 x SSC, pH 7,0,
incube em 72 °C (±1 °C) por 2 min.
3. Desidrate as lâminas em álcool gelado (-20 °C) de 70%,
85%, e 100%, incube cada uma por 2 min. Ar seco em TA.
4. Desnature a mistura de sondas em 90 °C por 10 min e coloque
diretamente no gelo.
5. Misture o conteúdo da sonda com vórtex e se assegure que o seu
conteúdo está na parte de baixo para uso.
6. Aplique a sonda à lâmina desnaturada, cubra com lamínula, lacre
com rubber coement
Prosseguir com a hibridização.
Estimulação
429 ±20 nm
495 ±20 nm
546 ±12 nm
Emissão
470 ±30 nm
525 ±30 nm
580 ±30 nm
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