Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 35

Kreatech FISH probes
Foire Aux Questions (FAQ)
J'obtiens des signaux faibles, voire pas de signal du tout
• Refaites l'hybridation en vous assurant, avant utilisation, que la
sonde a été bien mélangée et qu'elle est à TA.
• Refaites l'hybridation en vous assurant que la stringence du
lavage (tampon de lavage Wash Buffer I) est à la bonne
température (72 °C (±1 °C)).
• Tenez compte de la chute de la température lorsque vous ajoutez
des lames aux réactifs préchauffés.
• Utilisez au minimum 10 μl de sonde par lamelle de 22 x 22 mm.
• Assurez-vous que les filtres et la source de lumière du microscope
sont adéquats et en bon état de marche.
J'ai un bruit de fond très présent ou une hybridation croisée spécifi-
que quand j'utilise des sondes centromériques ou subtélomériques.
• Augmentez la température de stringence du lavage (tampon de
lavage Wash Buffer I) lors du Lavage des lames.
Qté minimale de sonde à appliquer :
Taille de la lamelle en verre
22 x 22 mm
22 x 32 mm
22 x 50 mm
Recommandations concernant la procédure :
La température et la concentration du tampon (stringence) de
l'hybridation et du lavage sont importantes car une faible stringence
peut entraîner une liaison non-spécifique de la sonde à d'autres
séquences, et une forte stringence peut entraîner l'absence de
signal. Une dénaturation incomplète de l'ADN cible et/ou de l'ADN de
la sonde peut entraîner l'absence de signal.
Qté minimale de sonde à appliquer
10 μl
15 μl
23 μl
35