Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 45

Kreatech FISH probes
Muito background
• Digestão não-ideal do tecido. O tecido pouco digerido aumenta a
background. Molhe a lamínula em 2 x SSC, pH 7,0 por 2 min em TA.
Prolongue a digestão da proteína por 2 - 20 min.
• Aumente a temperatura da lavagem de estringência
(tampão de lavagem I) quando lavar as lâminas.
Hibridização cruzada ao usar sondas centroméricas.
• Aumente a temperatura da lavagem de estringência
(tampão de lavagem I) quando lavar as lâminas.
Aplicação mínima de sondas:
Tamanho da lamínu-
la de vidro
22 x 22 mm
22 x 32 mm
22 x 50 mm
Recomendações para o procedimento:
A temperatura e a concentração do tampão (estringência) de
hibridização e de lavagem são importantes, uma vez que uma
estringência mais baixa pode resultar em ligação não específica da
sonda a outras sequências, e uma estringência mais elevada
pode resultar em falta de sinal. A desnaturação incompleta do
DNA alvo e/ou do DNA da sonda pode resultar em falta de sinal.
Materiais necessários, mas não fornecidos: reagentes:
1. Xilol
2. Formamida
3. Álcool de 100%, 85% e 70%
4. 0,01 M de citrato de sódio, pH 6,0 ou 8% de tiocianato de sódio
5. 0,01 M de HCl e 0,2 M de HCl
Aplicação mínima de sondas
10 μl
15 μl
23 μl
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