Leica Kreatech FISH probes Mode D'emploi page 31

Kreatech FISH probes
Sinon, vous pouvez également utiliser les protocoles suivants :
Prétraitement :
Protocole I (protocole standard - si pas suffisant, utilisez le Protocole
II)
1. Pour vieillir les lames, faites les cuire pendant 10 minutes (min)
à 80 °C, puis laissez-les refroidir à Température Ambiante (TA).
2. Incuber les lames pendant 1 min à TA dans de l'acide acétique
à 70 % fraîchement préparé dans de l'H
3. Incuber les lames pendant 30 secondes à TA dans 1 x PBS (pH 7,4)
4. Incuber les lames pendant 5 min à TA dans 1 x PBS (pH 7,4).
5. Déshydratez les lames dans de l'éthanol à 70 %, 85 % et 100 %,
pendant 1 min chaque à TA. Laisser sécher à l'air à TA.
Procéder à la préparation de la sonde.
Protocole II (pour des lames présentant beaucoup de cytoplasme
ou pour des préparations directes (liquide amniotique ou villosités
choriales)
1. Préchauffez 2 x SSC (pH 7,0) et HCl 0,01 M à 37 °C
2. Incuber les lames sèches dans du 2 x SSC (pH 7,0) à 37 °C pendant
2 min.
3. Ajoutez la pepsine à l'HCl 0,01 M préchauffé pour obtenir une
concentration finale de 0,005 %.
4. Placez les lames pendant 5 - 15 min (durée dépendante de
l'échantillon) dans la solution de 0,005 % de pepsine dans
l'HCl 0,01 M, puis faites incuber à 37 °C
5. Placez les lames pendant 3 min à TA dans 1 x PBS (pH 7,4)
6. Post-fixez les lames dans une solution de formaldéhyde 1 % dans
1 x PBS / MgCl
7. Placez les lames pendant 3 min à TA dans 1 x PBS (pH 7,4)
Déshydratez les lames dans de l'éthanol à 70 %, 85 % et 100 %,
pendant 1 min chaque à TA. Laisser sécher à l'air à TA.
Procéder à la préparation de la sonde.
20 mM pendant 10 min à TA.
2
O désionisée (dH
2
31
O).
2